- ￥2490
- YBio/钰博生物
- YB13-762820
- 中国
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Enterohemorrhagic E. coli(EHEC)
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
Enterohemorrhagic E. coli(EHEC)
肠出血性大肠杆菌 O157:H7 血清型(Enterohemorrhagic E. coli， EHEC)是能引起人的出血性腹泻和肠炎的一群大肠埃希氏菌。该菌会引发出 血性结肠炎，通常是突然发生剧烈腹痛和水样腹泻，数天后出现出血性腹泻， 可发热或不发热。部分患者可发展为溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少 性紫癜等，严重者可导致死亡，因此快速检测肠出血性大肠杆菌 O157:H7 血 清型具有重要意义。本产品是根据 PCR 原理开发的肠出血性大肠杆菌 O157:H7 血清型检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩肠出血性大肠杆菌 O157:H7 血清型，
与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
规格及成分：
| 成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 90805 | 1 mL（红盖） |
| 超纯水 | 100935 | 1 mL（亮黄色） |
| 肠出血性大肠杆菌O157:H7血清型PCR 引物混合液 | 13-62820yw | 100 μL（白盖） |
| 肠出血性大肠杆菌O157:H7血清型PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL） | 60908-62820pc | 50 μL（黄盖） |
| 使用手册 | 13-62820sc | 1份 |
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 肠出血性大肠杆菌 O157:H7 血清型 PCR 阳性 对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后 最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照 |
PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 肠出血性大肠杆菌O157:H7血清型PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
| PCR 阴性对照（水） | - | 18 μL | - |
| PCR 阳性对照（肠出血性大肠杆菌O157:H7血清型PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液） | - |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 （35 个循环） |
95℃ | 30sec |
| 55℃ | 30sec | |
| 72℃ | 30sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提 供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。
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