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文献和实验制滴菌素A对小鼠克隆胚胎的染色体重建、DNA复制及转录活性的影响
的多克隆抗体(1:100稀释),兔抗组蛋白H3丝氨酸28磷酸的多克隆抗体(1:100稀释),兔抗组蛋白H3赖氨酸4乙酰基多克隆抗体(1:100稀释),兔抗组蛋白H3赖氨酸4二甲基多克隆抗体(1:100稀释)和鼠抗BrdU单克隆抗体(6μg/mL)。用鼠抗Lamin B单克隆抗体标记细胞膜。二抗为Alexa-Fluor-568 标记的山羊抗鼠 IgG抗体或Alexa-Fluor-488 标记的鸡抗兔 IgG抗体(1:200稀释)。用2 μg/mL4,6-diamidino
消化法原代培养兔胸主动脉平滑肌细胞用DMEM配0.2%的1型胶原酶(用20的血清的DMEM配可能更好,有类似文献),分装于青霉素小并,每并2-3ml。1只免的胸主动脉置于1瓶消化液中消化,消化约10几个小时(消化程度的把握要体会),离心后,接种(若见细胞量大,成功把握大),绝对静置3天(没必要看,看多了无益),8天可传代。犬胸主动脉平滑肌贴块法——方法成熟,比消化法好控制的多。1、取材过程要快,取好放4度储存的D-hanks液带入超净台,不然先天不足;2、块大小密度影响不是很大(尽量小),关键
)的培养基(HAT)中生长进行选择。在融合后的细胞群体里,尽管未融合的正常脾细胞和相互融合的脾细胞是HGPRT+,但不能连续培养,只能在培养基中存活几天,而未融合的HGPRT-骨髓瘤细胞和相互融合的HGPRT-骨髓瘤细胞不能在HAT培养基中存活,只有骨髓瘤细胞与脾细胞形成的杂交瘤细胞因得到分别来自亲本脾细胞的HGPRT和亲本骨髓瘤细胞的连续继代特性,而在HAT培养基中存活下来。实验的结果完全像起始设计的那样,最终得到了很多分泌抗绵羊红细胞抗体的克隆化杂交瘤细胞系。用这些细胞系注射小鼠后能形成肿瘤
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