人男性正常龟头细胞(Hs68)

人男性正常龟头细胞(Hs68)
细胞介绍
该细胞 1969 年由 Owens RB 建立。

细胞特性
1  来源：人正常龟头
2  形态 ：成纤维细胞样，贴壁生长
3  含量：>1x10 6 个/mL
4  污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5  规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装

人男性正常龟头细胞(Hs68)运输和保存 ：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。

细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
1）准备 D/F12 培养基；北美胎牛血清(UnitedStates，GIBCO，货号 16000-044)，20%；双抗 1%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养湿度为 70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二． 细胞 处理 ：
1） 复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）人男性正常龟头细胞(Hs68)细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良时，可进行细胞冻存。

下面 T25 瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗瓶底 1-2 次后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 2ml 完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM 离心 5 分钟去掉上清。用血清重悬浮，加 DMSO 至终浓度为10%。加入 DMSO 后迅速混匀，按每 1ml 的数量分配到冻存管中，注意冻存管做标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于 1X10 6 个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项：
1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。