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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 细胞类型:
源性细胞
- 供应商:
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 库存:
52
- 英文名:
E.G7-OVA
- 生长状态:
良好
- 年限:
2年
- 运输方式:
常温避光
- 物种来源:
小鼠
- 规格:
T25
细胞介绍
该细胞1988年建系,源自C57BL/6 (H-2 b)小鼠的经电转质粒pAc-neo-OVA的淋巴细胞系EL4。
细胞特性
1)来源:T淋巴细胞
2)形态:淋巴母细胞样,悬浮生长
3)含量:>lxl06个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者lmL冻存管包装
小鼠T淋巴瘤细胞(鸡OVA基因修饰)(E.G7-OVA)运输和保存:使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后,可在1000RPM,常温条件下,离心5min后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途:仅供科研使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备:
1.准备 RPIVM-1640培养基,添加 NaHC031.5g八,D-葡萄糖4.5g八,酸钠O.llg八,lOmMHEPES,0.05mM(3-巯基乙醇,0.4 mg/mlG418),90%;胎牛血清,10%。
2.培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理:
复苏细胞:将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入l〇cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检 查细胞密度。
细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
小鼠T淋巴瘤细胞(鸡OVA基因修饰)(E.G7-OVA)对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加l-2mL培养液后吹句,将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存:待细胞生长状态良时,可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM,常温条件下离心5分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,吹打均匀后,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。
注意事项:
收到细胞后,若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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文献和实验。他们选用ovalbumin (OVA)转染的EL4 细胞(E.G7 )接种裸鼠,结果不但未能像预期的达到排斥肿瘤的作用,反而促进了其生长。检测表明,肿瘤的生长并非是因为OVA 或者MHC I 抗原缺失,因为转染OVA特异的转基因T细胞,或者用OVA(或热变性的OVA)免疫小鼠,均不能激发有效的抗肿瘤免疫[24]。某些非补体固定的抗肿瘤抗体可保护肿瘤细胞免受补体激活抗体的溶瘤作用。实验证明,当CTL识别的肿瘤抗原被封闭后,则有利于肿瘤的生长和转移。目前对抗体诱发的抗原调变报道较多,但T细胞免疫应答引起
方法: 为了缩短免疫时间,京天成使用了保密配方的佐剂,将其用于小鼠的免疫。 第0天 抗原与保密配方佐剂混合,肌肉和皮下注射多点。 第5天 第二次加强注射; 第14天 尾静脉采集血清,ELISA检测; 一般情况下,我们在第14天即可观察到较强的免疫反应,随即进行融合。 e、杂交瘤细胞的克隆 常用的克隆方法为:取小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞进行融和,3天后将细胞分配到10块96孔板继续培养14天后, 取细胞上清液,通过ELISA检测。 阳性孔内的细胞,按倍比
-sylphosphatidylinositol,GPI)连接方式“锚”在细胞膜上。少数白细胞分化抗原是碳水化合物半抗原。白细胞分化抗原参与机体重要的生理和病理过程。假如:(1)免疫应答过程中免疫细胞的相互识别,免疫细胞抗原识别、活化、增殖和分化,免疫效应功能的发挥;(2)造血细胞的分化和造血过程的调控;(3)炎症发生;(4)细胞的迁移如肿瘤细胞的转移等。 第一节 白细胞分化抗原的分类 80年代初以来,由于单克隆抗体,分子克隆、基因转染细胞系等技术在白细胞分化抗原研究中得到广泛深入的应用,有关白细胞分化抗原的研究
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