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- 2025年07月11日
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信帆生物
简单介绍:基因克隆表达
注意事项:pET-32a(+)是一种常用的融合蛋白类型原核高效表达载体,含有抗氨苄青霉素基因。表达由宿主细胞提供的T7RNA聚合酶诱导
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文献和实验编码区的基因片段，其由5'末端的stat密码子（ATG）和3'末端的终止密码子（TAA，TAG或TGA）结合。然后将目的基因片段插入pMD18-T载体中以构建重组质粒，通过DNA测序鉴定。用指定的酶消化重组pMD18-T质粒，并通过以下方案将检索到的目的DNA片段亚克隆到pET-32α（+）载体中以产生重组表达载体。将约129bp的TBO基因片段插入pET-32α（+）载体（5900bp）用相同的限制酶在37℃消化pET-32α（+）载体和重组pMD18-T载体1小时，然后通过在65℃温育10分钟
walterxp 各位前辈，我想请问一下pet32a用什么受体菌做表达比较好，我只有DH5α。谢谢 花生剥了壳 可以用Rosetta或者BL21，表达的都挺好。 walterxp 好的谢谢 我用BL21了 guoda11 BL21，我看行！用pET32a作为表达载体，我们实验室很多真核蛋白都实现了可溶性表达！ 本文由丁香园论坛提供，想了解
晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction system（pET系列质粒）的发明者。 T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了，但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统
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