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赛贝生物(Cellapy®)使用高效、安全的仙台/Episome电转的方法,产生非整合的人iPS细胞,为广大科研工作者提供重编程服务。
在体细胞样本方面,赛贝可通过血液、尿液、皮肤成纤维等方式收集细胞样本进行重编程,整个程序快捷、稳定,重复性好,所产生的诱导多能干细胞具备出色的分化能力。
| 服务项目 | 基本程序 | 验收标准 | 时间 |
| 外周血单个核细胞分离 | 采集外周血,分离单个核细胞,冻存留种 | 得到足量适合重编程的单个核细胞(提供单个核细胞细胞图片1套) | 10-20天 |
| 体细胞重编程 | 质粒电转 | 得到原代iPS克隆(提供重编程过程前,中,后具有典型代表的1套图片) | 40天 |
| 单克隆细胞扩增 | 挑取单克隆扩增 | 得到单克隆iPS细胞系挑出原代克隆后传3-10代(提供单克隆状态图1套,含40x,100x和200x) | 30-50天 |
| hiPSC多能标志物鉴定(免疫荧光) | 免疫荧光染色(Oct4,Nanog, Sox2,SSEA4) | 细胞免疫荧光照片 | 20天 |
| hiPSC核型鉴定 | 中期处理,G带分析 | 一套:滴片图和染色体G带图 | 20天 |
| EB体外分化检测---PCR | 制备EB,体外培养后,收集样本进行PCR检测 | PCR检测结果 | 20天 |
| 诱导多能干细胞体内分化鉴定---畸胎瘤实验 | 裸鼠接种细胞,石蜡切片HE染色 | 细胞HE染色及图像(内、 中、外、三胚层各一套。说明:蜡块和染片均邮寄客户。 | 60天 |
| 合计 | 6-8月 | ||
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文献和实验Cell Stem Cell:邓宏魁课题组建立更加快速高效的人体细胞化学重编程体系
多潜能干细胞具有无限自我更新和分化成生物体所有功能细胞类型的能力,这些神奇的特质使其在细胞治疗、药物筛选和疾病模型等领域具有广泛的应用价值,是再生医学领域最为关键的「种子细胞」。如何在体外诱导获得多潜能干细胞一直是生命科学领域的关键科学问题。 生命的本质是化学过程,通过化学小分子调控细胞命运,理论上是最有效的方式。化学重编程与传统重编程技术存在本质区别:传统转基因重编程技术如诱导多潜能干细胞技术(iPS 技术),是通过细胞内源转录因子的过表达,驱动细胞命运发生直接转变,其诱导过程难以控制
iPS细胞在治疗血液疾病的应用Xu等将iPS细胞诱导分化为内皮前体细胞,然后移植到患有血友病小鼠的肝脏中,使病鼠出血不止的症状得到了有效地改善。Hanna等人将患病小鼠尾尖成纤维细胞重编程为 iPS细胞,然后通过同源重组的方法用人野生型 p A.珠蛋白基因替代了 pass珠蛋白基因,接着把遗传修饰后的 iPS细胞定向分化为造血祖细胞 (HPs),并将纯化后的 HPs移植入 hps /llps雄性小鼠中,Has有效地抑制了镰刀形红细胞贫血症症状。日本用人类iPS细胞制成血小板,日本东京大学干细
,很不幸于 2012 年死在了 III 期临床。原因可能是研发的过程只在 ALS 小鼠模型中测试过,并没有在小鼠甚至人的 ALS 运动神经元中测试。候选药物是否对运动神经元尤其是人来源的运动神经元起作用完全无法确定!干细胞技术的应用解决了这个问题。2006 年,日本科学家山中伸弥(Shinya Yamanaka)用 4 个转录因子将小鼠体细胞在体外重编程为诱导多能干细胞(即 iPS 细胞)。从此,iPS 细胞研究改变了基础研究的面貌,山中伸弥也因此获得 2012 年诺贝尔生理或医学奖。iPS 细胞
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