植物基因组DNA提取试剂盒（磁珠法)

特别提示：包括植物基因组DNA提取试剂盒（磁珠法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：植物基因组DNA提取试剂盒（磁珠法)
英文名称：Magnetic Plant Genomic DNA Extraction Kit
产品货号：WH0120
产品规格：50次|200次

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，可以从多种植物组织中分离纯化高质量基因组DNA。独特包埋的磁珠，在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程安全、便捷，提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠，尤其适合高通量工作站的自动化提取。使用本试剂盒纯化的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交、芯片检测、高通量测序等实验。

产品特点：
·简便快捷：1h内即可获得超纯的基因组DNA；
·高通量：可整合移液法和磁棒法自动化仪器进行高通量提取实验；
·广泛：适用于多种植物组织；
·安全无毒：无需酚/氯仿等有毒有机试剂；
·纯度高：获得的DNA纯度高，可直接用于芯片检测、高通量测序等实验。

提取得率：（以100mg不同植物幼嫩叶片为例，OD₂₆₀/OD₂₈₀：1.7～1.9)

植物材料	平均DNA产量
小麦	18-25μg
松树	25-30μg
马铃薯	4-6μg
番茄	10-15μg
烟草	10-15μg
水稻	10-25μg
大豆	10-25μg
玉米	20-30μg
棉花	10-25μg

试剂盒组成：

组分	50次	200次
缓冲液GPM	25ml	100ml
缓冲液GPM plus	25ml	100ml
缓冲液GHB	20ml	80ml
去蛋白液RD	12ml	48ml
漂洗液PWB	15ml	50ml
RNase A（10mg/ml）	300μl	1.25ml
磁珠悬浮液G	1ml	3×1ml
洗脱缓冲液TB	15ml	60ml

储存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中孵育10min，以溶解沉淀。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。）
1．本产品适用于手工提取或自动化仪器整合。
2．自备试剂：异丙醇，无水乙醇。
3．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
4．若裂解液GHB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

操作步骤：
使用前请先在去蛋白液RD和漂洗液PWB中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶子上的标签。

一、手工操作步骤
1．取植物新鲜组织约100mg或干重组织约30 mg，加入液氮充分碾磨。
  
2．将研磨好的粉末迅速转移到预先装有400μl缓冲液GPM和5 μl RNase A（10 mg/ml）的离心管中，迅速颠倒混匀后，将离心管放在70℃水浴10min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
  注：若提取富含多糖多酚的植物组织，可使用缓冲液GPM plus。
3．12000rpm （~13400×g )离心4 min，转移300 μl上清至新的离心管中。
4．加入300 μl缓冲液GHB，300 μl异丙醇和15 μl磁珠悬浮液G，振荡混匀。
5．室温放置5 min。
6．将离心管放置于磁力架上静置1 min，待磁珠完全吸附时小心去除液体。
7．将离心管从磁力架上取下，加入500 μl去蛋白液RD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡混匀30 sec。
8．将离心管放置于磁力架上静置30 sec，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
9．加入600 μl漂洗液PWB（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡混匀30 sec。
10．将离心管放置于磁力架上静置30 sec，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
11．重复步骤9和10一次。
12．将离心管于磁力架上，室温晾干10-15 min。
  注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱DNA。
13．将离心管从磁力架上取下，加入50-100 μl洗脱缓冲液TB，振荡混匀，置于65℃孵育3 min。
14．将离心管放置于磁力架上静置1 min，磁珠完全吸附后，小心将DNA溶液转移至一个新离心管中，并于适当条件保存。

二、移液法自动化仪器提取步骤
准备工作及注意事项：
1．本产品可整合Hamilton Microlab STAR、Beckman Coulter Biomek? FX等移液法自动化仪器进行高通量基因组提取工作。
2．植物样本的处理：同手工操作步骤1-3，裂解完成后转移300 μl上清至96孔深孔板内。
3．磁珠稀释液的配制：按照15 μl磁珠悬浮液G加入85 μl异丙醇的比例混合，混合后每个样本用量为100 μl。
4．对于Hamilton Microlab STAR类的仪器，有放置2ml离心管的板位，可以不使用异丙醇来稀释磁珠，异丙醇的加入体积仍为300 μl。每个离心管可以放入1 ml左右的磁珠，吸取磁珠前吹打混匀5次，直接进行15 μl磁珠的分液操作，分液完成后将磁珠管盖盖好保存。
5．考虑仪器设定温度和96孔板内的实际温度有一定的偏差，在裂解和洗脱时建议仪器设定温度比实际使用温度高出10℃。
提取步骤：
1．在96深孔板（自备)中加入300 μl处理好的植物样本上清液。
2．每孔加入300 μl裂解液GHB，吹吸6次。
3．每孔加入215 μl的异丙醇，吹吸6次。
4．每孔加入100 μl磁珠稀释液，吹吸6次，然后振荡混匀10min。
5．将深孔板放置于磁力架上静置2 min，磁珠完全吸附后，吸去液体。
6．将深孔板从磁力架上取下，加入500 μl去蛋白液RD，吹吸6次，振荡混匀2 min。
7．将深孔板放置于磁力架上静置30 sec，磁珠完全吸附后，吸去液体。
8．将深孔板从磁力架上取下，加入600 μl漂洗液PWB，吹吸6次，然后振荡混匀2 min。
9．将深孔板放置于磁力架上静置30 sec，磁珠完全吸附后，吸去液体。
10．重复步骤8和9一次。
11．将深孔板置于磁力架上，37℃晾干5 min。
12．将深孔板从磁力架上取下，加入50-100 μl洗脱缓冲液TB，置于65℃，振荡混匀10min。
13．将深孔板放置于磁力架上静置2 min，磁珠完全吸附后，小心将DNA溶液转移至收集板中，并于适当条件保存。

三、磁棒法自动化仪器提取步骤
准备工作及注意事项：
1．本产品在Thermo KingFisher Flex等自动化仪器上整合成功。
2．植物样本的处理：同手工操作步骤1-3，裂解完成后转移290 μl上清至含有290 μl缓冲液GHB和290 μl异丙醇的96孔深孔板内。
3．将含有植物样本上清液，缓冲液GHB和异丙醇、500 μl去蛋白液RD、600 μl漂洗液PWB和50-100 μl洗脱缓冲液TB分别加到96孔板相应的位置上，将15 μl磁珠G加入到500 μl去蛋白液RD中。
提取步骤：
1．将处理好的植物样本上清液加入到含有缓冲液GHB和异丙醇的96孔样品板里。
2．将96孔板置于自动化提取仪中，室温孵育5 min，期间中速和快速间隔拍打混匀。
3．使用磁力套深入到含有磁珠的去蛋白液MRD的孔中，快速拍打混匀1 min，吹散磁珠。
4．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20 sec。
5．将磁珠转移到含有植物样本上清液，缓冲液GHB和异丙醇的孔中，释放磁珠，中速和快速间隔拍打混匀10min。
6．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20 sec。
7．将磁珠转移到含有第一遍去蛋白液RD的孔中，释放磁珠，快速拍打混匀3 min。
8．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20 sec。
9．将磁珠转移到含有第一遍漂洗液PWB的孔中，释放磁珠，快速拍打混匀3 min。
10．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20 sec。
11．将磁珠转移到含有第二遍漂洗液PWB的孔中，释放磁珠，快速拍打混匀3 min。
12．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20 sec。
13．磁力棒吸附磁珠后悬空晾干5 min。
14．将磁珠转移到含有洗脱缓冲液TB的孔中，75℃孵育，快速拍打混匀10min。
15．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次30 sec。
16．将吸附的废弃磁珠转移到含有去蛋白液RD的孔中，拍打混匀1 min。
17．程序结束后，小心将DNA溶液转移至收集板，并于适当条件保存。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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