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- 百奥莱博
- QN2864-RDE
- 北京
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
85
- 英文名：
Caspase-5 Activity colorimetric assay Kit
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格：
20T|50T|100T
特别提示：包括Caspase-5活性测定试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：Caspase-5活性测定试剂盒
英文名称：Caspase-5 Activity colorimetric assay Kit
产品货号：QN2864
产品规格：20T|50T|100T
本试剂盒适用于测定哺乳动物组织、细胞caspase-5活性。试剂盒测定原理基于Caspase-5特异水解其多肽底物N-acetyl-Trp-Glu-His-Asp-p-nitroanilide(Ac-WEHD-pNA)，释放出游离的硝基*胺pNA，后者呈黄色在405nm具有zuì大吸收峰，用可见光分光光度比色方法测定，吸光度值对应于Caspase-5的水解活性。
细胞凋亡属于程序化细胞死亡，可见于各种器官和细胞，在正常发育、生理、病理过程中对细胞和器官的稳态具有十分重要的调节作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含10多个成员。Caspase-5分子量47.7kD，与ICE有51%的同源性，在过量表达时可诱导凋亡发生。
试剂盒组成：
| 组分 | 规格(100T) | 保存条件 |
| 裂解缓冲液 | 20ml | 4℃ |
| 反应缓冲液 | 10ml | 4℃ |
| 2mM Ac-WEHD-pNA底物 | 0.5ml | -20℃避光 |
| 10mM pNA标准品 | 0.5ml | -20℃避光 |
所需仪器：酶标仪与96孔酶标板；或可见光分光光度计配100μl容积的石英比色杯。
工作波长：zuì大吸收波长405nm，如不具备也可在400～450nm范围内测定。
除了Caspase-5活性测定试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：
名称：增强型CCK-8试剂盒
货号：YT128
规格：100次|500次|2500次|10000次
本试剂盒是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒，比普通的CCK-8试剂盒具有更好的检测灵敏度和更宽的线性范围。
WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考图1)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。
WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。
本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的增强型CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。
WST-8对细胞无明显毒性。加入增强型CCK-8溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到zuì佳测定时间。
注意事项：
1. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈zuì容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
2. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。
3. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
储存条件：4℃避光，有效期一年。
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文献和实验发光基团pNA游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1．准备工作： A、 裂解液溶解后混匀，冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备：每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT，冰浴备用。 2．样本处理： A、悬浮细胞 1） 诱导完成后的细胞，2000 rpm离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS轻轻重悬细胞并计数
。试剂盒比较便宜，KeyGene公司有。 2. 流式细胞法，只要有流式细胞仪，买来试剂盒按照说明操作即可，优点是可以同时检测多种caspase的活性。价格较贵。 3. WB的方法，比较繁琐，通过半定量比较活化caspase蛋白（即裂解的小片段）的量判断活性强弱。 选择哪种方法根据实验要求和条件，1或2同3的联合使用，应该最能说明问题。附件是流式法的一个说明书，个人见解仅供参考。 yqsqzr 那是否可以通过流式
。Caspase-3 正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的 Caspase-3 由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase 的活性明显下降。➤ 研究方法1. 分别使用 RIPA 和 2%SDS + 超声提取未激活 T 淋巴细胞（Lanes 1 和 5）和激活的 T 淋巴细胞（Lanes 2-4 和 6-8）裂解细胞提取总蛋白2. WB 进行 caspase
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