- ￥1990
- 康朗生物
- 中国/德国
- KL16-KL14400
- 2025年07月04日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
‘-20℃保存
- 保质期：
有效期一年
- 库存：
30
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 规格：
50次
PCR使用方法：
2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作：
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料
管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。
6. 95℃保温 10 分钟。
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。
二、设置 PCR 反应（40 uL 体系）
8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：
| 成份 | 样品（用量1） | 样品（用量2） | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 即用型 PCR Mix 3.0 | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
| PCR 引物混合液 | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
| 制备的样品 | 18 uL | 2 uL | 无 | 无 |
| 样品制备阳性对照 | 不加 | 不加 | 2 uL | 不加 |
| 样品制备阴性对照 | 不加 | 不加 | 不加 | 2 uL |
| 超纯水 | 不加 | 16 uL | 16 uL | 16 uL |
9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 10分钟 |
| PCR 反应 （35 个循环） |
94℃ | 45s |
| 56℃ | 45s | |
| 72℃ | 45s | |
| 延伸 | 72℃ | 5分 |
10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增
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文献和实验RNA 并将mRNA逆转录成 cDNA。随后，通过由PCR扩增的cDNA数量，确定 mRNA 的初始水平。这一过程也被称为逆转录 PCR， RT-PCR （图 1）。 图 1. RT-PCR.RNA 被逆转录成 cDNA，随后通过 PCR 扩增 cDNA 终点 PCR 可通过凝胶里的扩增产物条带强度对 RNA 的表达进行定量（一种半定量方法）。例如，对起始 cDNA 进行连续稀释并扩增。通过凝胶电泳使不同起始量的终点 PCR 得率可视化（图 2），然后对条带强度进行定量，并以管家基因为参照
Western Blot 又称为蛋白质印迹，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的基于抗体抗原之间特异免疫反应的一种定量或定性检测蛋白的实验方法。其基本原理为：聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同分子量的蛋白质样品分离，分离后的蛋白被转移到固相支撑物（杂交膜）上，抗体特异性识别目标蛋白，通过酶促反应或者化学发光等方法将目标蛋白可视化，从而对蛋白进行定性或者定量研究。「良好的开始是成功的一半」，尤其对于生物学实验，如果没有高质量的实验样本，等待我们的很可能是失败的实验结果。优质特异的蛋白
A、B，羊抗鼠二抗固定于硝酸纤维素膜上，金标AFP单抗C固定于玻璃纤维素膜上。阴性1条带，阳性2条带， 3条带为强阳性，不出现有色条带为试剂失效。 质控带 阳性 阳性 流动带 羊抗鼠二抗 单抗A 单抗B 金标单抗C 例3 金免疫层析法检测梅毒抗体（间接法）： 胶体金标记的抗人IgG，样品中的梅毒抗体与胶体金标记的抗人IgG结合，沿硝酸纤维素膜移动，在包被有基因重组的梅毒螺旋体抗原结合，出现红色反应线。 质控带 阳性 流动带 抗原 金标抗人IgG 2、金免疫渗滤分析 （1）试剂盒：渗滤
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