土拉热弗朗西斯菌PCR试剂盒

土拉热弗朗西斯菌PCR试剂盒

Francisella tularensis

产品及特点

土拉热弗朗西斯菌（Francisella tularensis）会引起土拉杆菌病，又称野 兔热，是一种自然疫源性疾病，主要感染野生啮齿动物并可传染给其他动物和 人类。感染后的主要表现为体温升高，肝、脾、肾肿大，充血和多发性粟粒坏 死，淋巴结肿大，并有针尖大干酪样坏死灶，该疾病的传播会给养殖业带来较 大的经济损失，因此快速检测具有重要意义。本试剂盒根据 PCR 原理开发，它 具有下列特点：

 

 

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增土拉热弗朗西斯菌.

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

土拉热弗朗西斯菌PCR试剂盒规格及成分

 

编号	成分	规格
试剂一	2×PCR MagicMix	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	土拉热弗朗西斯菌 PCR 引物混合物	100 μL（白盖）
试剂四	土拉热弗朗西斯菌 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	天净沙核酸释放剂	20 次（1mL，绿盖））
试剂六	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂   样品 DNA。
 

 

使用方法一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要 求的样品起始量）中加 10μL 斑点叉尾鮰病毒 PCR 阳性对照的 1 万倍稀 释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
土拉热弗朗西斯菌 PCR 引 物混合液	各2 μL	2 μL	各 2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（土拉热弗朗西斯菌 PCR 阳性对照的 1 万倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	15 sec
	55℃	15 sec
	72℃	10 sec
最后延伸	72℃	10 min

 

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照 必须有条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增 产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！