禽正呼肠孤病毒RT-PCR试剂盒

禽正呼肠孤病毒RT-PCR试剂盒

Avian Orthoreovirus

产品及特点

禽正呼肠孤病毒(Avian Orthoreovirus)会引起禽呼肠孤病毒感染，是鸡的一 种传染性疾病，可引起鸡多种疾病，包括病毒性关节炎、矮小综合征、呼吸道疾 病、肠道疾病和所谓吸收不良综合征。急性感染时，可见跛行，有些鸡发育不良。 慢性感染跛行更显著，有一小部分病鸡的踝关节不能活动。有时可能看不到关节 炎/腱鞘炎的临诊症状，但在屠宰时可见趾屈肌腱区域肿大。这样的鸡群增重慢， 饲料转换率低，总死亡率高，屠宰废弃率高，属于不明显感染，因此灵敏快捷的 诊断产品具有重要的意义。为此本公司开发了本产品，可用于在科研领域快速定 量检测禽正呼肠孤病毒。它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据禽正呼肠孤病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

禽正呼肠孤病毒RT-PCR试剂盒规格及成分

 

编号	成分	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黄盖））
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖）
试剂三	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂四	禽正呼肠孤病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂五	禽正呼肠孤病毒 RT-PCR 阳性对照（1 ×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂六	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。 

自备试剂 样品RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 禽传染支气管炎病毒 通用 RT-PCR 阳性对照的 100 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E6 拷贝/μL， 10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中， 充分混匀，此为 100 倍稀释液。）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加 水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用 水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

成分	N+2个制备所得样品	RT-PCR阴性对照	RT-PCR 阳 性对照管
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	各4 μL	4 μL	4 μL
禽正呼肠孤病毒 RT-PCR 引物混合 液	各2μL	2μL	2μL
N+2 个制备的 RNA 样品)	各12.5 μL
超纯水		12.5 μL
禽正呼肠孤病毒 RT-PCR 阳性对照 的 10000 倍稀释液			12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30 min
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	65 sec
延伸	72℃	7 min

 

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物， 则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照有预期扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有 预期 674bp 大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

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