蜂房小甲虫PCR试剂盒
Aeromonas spp
产品及特点
蜂房小甲虫(Aethina tumida)是蜂群的寄生虫。它的成虫和幼虫以蜂子、 蜂蜜和蜂花粉为食,导致幼蜂死亡、蜂蜜发酵及巢脾被破坏。小甲虫加速破坏蜂 巢,使成年蜜蜂逃逸。其损害程度可能取决于气候条件等因素,相比温度和湿度较 低的地区,蜂房小甲虫在较高的温度和高湿度下的危害一般更大。蜂蜜提纯设备 也是蜂房小甲虫潜在的繁殖场所,一旦蜂房小甲虫出现在这种设备中,这种危害 会更严重。从卵发育到成虫,蜂房小甲虫需要 3~12 周,周期长短取决于湿度、温 度和食物供应。成虫飞行时所到之处,所有规模的蜂群都会被侵扰,因此蜂房小 甲虫的快速检测具有重要的意义。本试剂盒根据 PCR 原理开发,它具有下列特 点:
1. 即开即用,用户只需要提供细菌 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增蜂房小甲虫。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。 6. 本产品只能用于科研。
蜂房小甲虫PCR试剂盒规格及成分
编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
PCR Magic Mix 3.0 |
1 mL(红盖) |
试剂二 |
超纯水 |
1 mL(亮黄盖) |
试剂三 |
蜂房小甲虫 PCR 引物混合液 |
100 μL(白盖) |
试剂四 |
蜂房小甲虫 PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL(黄盖) |
试剂五 |
天净沙核酸释放剂试用装 |
20 次(1mL、绿盖) |
试剂六 |
使用手册 |
1 份 |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳 性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL 阳性对照的10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作 为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的天净沙核酸释放剂, 本产品的裂解液可以直接作为 PCR 模板,省略了 DNA 提取步骤。
二、设置 PCR 反应(40 μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性 对照管 |
标准曲线 样品管(2-7 管) |
PCR Magic Mix 3.0 |
各20 μL |
20 μL |
20 μL |
蜂房小甲虫 PCR 引物混合液 |
各2 μL |
2 μL |
2 μL |
N+2 个样品 DNA 模板 |
各 18 μL |
|
|
样品制备阴性对照(超纯水) |
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18 μL |
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蜂房小甲虫 PCR 的 1 万倍稀释液 |
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|
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应
过程 |
温度 |
时间 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
PCR 反应 (40个循环) |
95℃ |
15 sec |
55℃ |
15 sec |
72℃ |
60 sec |
72℃ |
10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 109bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩 增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!