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- 文献和实验
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上海恪敏生物科技有限公司
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箱
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文献和实验药物的介质,而加药组加入不同浓度的药物。8.避免血清干扰。用含15%胎牛血清培养液培养细胞时,高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加,会试验敏感性。因此,一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后,尽量吸净培养孔内残余培养液。实验步骤贴壁细胞:1.收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。2.5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可
water:无Rnase的水。方法是:将DEPC按0.01%(V/V)加在dH2O中500 ml(50 ul),在37 ℃过夜,并高压灭菌即得(150 ℃ 3小时) 5. 一次性塑料手套 6. 注意:DEPC有致癌之嫌 7. 抽提出的细胞总RNA干燥后加水50 ul,取10 ul加无Rnase水990 ul,稀释100倍成1 ml。于0.5 cm厚的石英比色杯中,以无Rnase水为对照,在721型紫外分光光度计下检测,结果应为:A260/280 ratio 8. 分离组织10 mg
。 用含15%胎牛血清培养液培养细胞时,高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加,会试验敏感性。因此,一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后,尽量吸净培养孔内残余培养液。 二、实验步骤 (一)贴壁细胞 1. 收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100 ul,铺板使待测细胞调密度至1 000-10 000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。 2. 5%CO2,37 ℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可
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