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小鼠
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顺丰快递
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- 规格:
1ml/T25
细胞接受后的处理:
1) 收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的完全培养基。
4) 如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5) 接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
Nanog-GFP小鼠胚胎干细胞Nanog-GFP细胞价格
- 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的复苏
- 小鼠胚胎干细胞的复苏(以T25为例)
- 水浴锅37°C预热,将小鼠胚胎干细胞完全培养液温浴到37°C。
- 从液氮中取出冻存的小鼠胚胎干细胞,放入水浴锅中,快速晃动使管中的细胞尽快融化,仔细观察,待剩最后一块冰晶时,快速取出。
- 用75%酒精擦拭消毒冻存管口的外表面,在超净台中打开冻存管,将细胞冻存悬液转移至含有4ml完全培养基的离心管中,注意减少气泡的产生。
- 为了减少细胞损失,再往冻存管中加入1ml完全培养基,稍微吹打,收集至离心管中。
- 将细胞悬液离心1000rpm/5min。离心期间,将MEF细胞换用小鼠胚胎干细胞完全培养液。
- 离心后,去除上清,加入1ml小鼠胚胎干细胞完全培养液,,轻轻吹打混匀。
- 将小鼠胚胎干细胞按10000-40000个活细胞/cm2的密度接种到已经换好液的MEF细胞中,轻轻摇晃培养瓶,使细胞均匀分布。放入37°C,5%CO2的培养箱中培养。
- 复苏后第二天,给复苏的细胞换用新鲜的小鼠胚胎干细胞完全培养基(已37°C预热)。每天换液。
- 小鼠胚胎干细胞的传代
- 当小鼠胚胎干细胞的克隆较大,出现分化或即将分化;或者由于复苏或传代接种的密度的问题,即将出克隆间融合,就必须传代。
- 传代前准备,提前1-3天准备MEF细胞
- 将小鼠胚胎干细胞完全培养基,小鼠胚胎成纤维细胞完全培养液,0.25%胰酶(含ETDA),PBS 预热至37°C。
- 吸弃培养瓶的旧培养液,加入2ml PBS洗涤细胞,吸弃PBS,加1ml 0.25%胰酶覆盖细胞表面,消化,显微镜下观察,约70-80%左右的细胞变圆后,用手轻拍培养瓶的壁,使细胞脱落下来。
- 立即加入1ml 小鼠胚胎成纤维细胞完全培养液,终止消化。轻轻吹打混匀。
- 将细胞悬液转移到15ml 离心管中。1000rpm/5min。
- 离心期间,将MEF细胞换用小鼠胚胎干细胞完全培养液。
- 离心后,去除上清,加入1ml小鼠胚胎干细胞完全培养液,,轻轻吹打混匀。
- 将小鼠胚胎干细胞按10000-40000个活细胞/cm2的密度接种到已经换好液的MEF细胞中,轻轻摇晃培养瓶,使细胞均匀分布。放入37°C,5%CO2的培养箱中培养。
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文献和实验系,这一高效率保证他们在每项实验中都能得到数个细胞系。相关论文在线发表于《细胞》上。而Thomson小组则可谓从头开始,他们独自确定了14种新的候选重组基因。通过系统的排除过程,他们最终也使用了4个基因——OCT3,SOX2,NANOG和LIN28,其中前两个和Yamanaka小组是相同的。Thomson和同事利用的是胎儿皮肤细胞以及一个新生儿的包皮细胞。与Yamanaka小组相比,这项研究需要1万个细胞才能分离出一个iPC细胞系,但对实验而言已经足够了。相关论文在线发表于《科学》上。美国遗传学与社会中心
Using MicroRNAs to Enhance the Generation of Induced Pluripotent Stem Cells
MEFs (CF‐1, Oct4‐GFP, etc.; see protocol 1 ) microRNA mimics (miR‐93, 106b, Dharmacon; Li et al., ) Opti‐MEM
重复DNA的功效,但是,当细胞开始老化或是DNA断裂情况发生的时候,Sir复合物会失去原来的功能,变得不具有沉默基因的能力,并最终导致酵母失去自我增殖的能力,这是酵母老化过程中伴随发生的典型特征。 为了解哺乳动物是否具有相似的情况,研究者用小鼠胚胎干细胞来进行试验,结果发现SIRT1的功能与酵母的 Sir2相似,SIRT1具有抑制重复DNA片段各种基因表达的功能。当DNA发生断裂的情况时,SIRT1就会从基因组转座子上掉落,并重新定位促进 DNA修复,改变转录过程,这一情况在老化的细胞中同样
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