nk-92mi人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞

细胞名称

NK-92MI 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞

货号

H103

种属

人

细胞来源

ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

悬浮 淋巴母细胞养 成团聚集

培养条件

培养基：a-MEM（无核酸，有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠） +43.2μg/mL Inositol+8.82μg/mL Folic acid+0.1mM 2-巯基的乙醇+12.5%FBS+12.5%HS+1% P/S（推荐HAKATA优等胎牛血清，货号:HN-FBS-50; 马血清，货号：HM-FBS-50）

温度：37℃     气相：95%空气,5% CO2

传代

1. 用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其竖直置于培养箱中进行2-4小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，小心吸取上层培养基，留2-4ml培养基以将大部分细胞留在培养瓶底部，加入新鲜培养基。吸取出的旧培养基1000r/min 离心5min后，去除上清，根据细胞数量决定是合到一起还是另行取新培养瓶培养。根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液或传代，每2至3天加入新鲜培养基（根据细胞密度）,尽量少用离心的方式换液;

2. 通过添加新鲜培养基来维持培养。或者可以通过离心去除旧培养基，再加入新培养基并以2-3×10⁵个活细胞/mL的密度再悬浮进行培养。建议将细胞密度维持在2×10⁵个至1×10⁶个细胞/mL之间。当细胞团过大时可轻轻吹打成小细胞团，不要吹打过度。

保存

冻存条件：90%FBS+10%DMSO

(备注：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。)

保存条件：液氮存储

供应限制

仅供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时）

3.细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。