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- 百奥莱博
- RFT110-QAH
- 北京
- 2025年08月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
838
- 英文名：
pRT20-T vector
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
特别提示：包括pRT20-T载体克隆试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：pRT20-T载体克隆试剂盒
英文名称：pRT20-T vector
产品规格：20次
pRT20-T 载体是一种高效克隆PCR产物(TA Clonging)的专用载体。它是由pUC19载体改造成的(pRT20-T载体在pUC19质粒MCS位点附近插入T7启动子序列)，MCS位点经过EcoR V酶切后在两侧的3’端添加”T”制备而成。因大部分Taq酶会在PCR产物的3’末端添加一个“A”，所以用本载体可以高效地进行PCR产物克隆。
试剂盒组份：
| 内容 | 浓度 | 总量 |
| pRT20-T vector | 25 ng/μl | 20μl×1支 |
| 2×ligation solution | - | 150μl×1支 |
| Control insert(700bp) | 12.5 ng/μl | 10μl×1支 |
| M13F(-47) | 10μM | 20μl×1支 |
| M13R(-48) | 10μM | 20μl×1支 |
| Water(RNase-free,DNase-free) | - | 1ml×1支 |
本载体在pUC19载体的基础上对LacZ基因的编码序列进行了改造，加强了重组菌落在X-gal/IPTG/Amp/LB琼脂平板上的颜色筛选，具有更明显的蓝色菌落颜色，大大降低了假阳性率。由于在MCS位点附近插入了T7启动子序列，因此可以对插入DNA片段直接进行体外转录实验。
本载体在插入位点两侧各有一个BamH I位点，可以用BamH I直接酶切检测重组子，简化了检测程序。按照标准连接体系计算(10μl体系用1μl载体)，本载体可至少使用20次。包装内含有了2×ligation solution，是混合有T4 连接酶，连接buffer以及连接增强剂的MasterMix，使用方便，且能显著提高连接效率。另外，包装内提供M13引物，可以方便用菌落或菌液PCR快速检测阳性克隆。
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
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文献和实验本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（>7-8 kb），经转化
在相同的模板、引物和反应体系下，用ABI7000荧光定量PCR仪也进行了其荧光定量产品和国际知名厂家A品牌，以及T品牌相关产品的对比实验。 实验材料 小鼠肝脏组织 实验方法 RNA提取：BioTeke RNApure高纯总RNA提取试剂盒，操作步骤请参考说明书。 目的基因：小鼠管家基因β–actin cDNA制备：测定小鼠肝脏总RNA浓度后，使用BioTeke Super RT Kit 制备20μl cDNA.操作步骤参照试剂盒说明书。 二步法荧光定量PCR： 小鼠
位点176－197 lacZ起始密码子180 lac操纵子200－216 β内酰胺酶编码区1337－2197 噬菌体f1区2380－2835 lac操作子序列2836－2996,166－395 pUC/M13正向测序引物结合位点2956－2972 T7RNA聚合酶启动子（－17至＋3）2999－3 （2）目的片段与T载体的连接和转化 采用PromegaT载体克隆试剂盒（pGEM-TEasySystemIkit）进行DNA片段克隆，具体步骤如下： 1）按下表混合各反应
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