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219
- 英文名:
Band-Now Pre-Staining Protein Sample Treatment Buffer for SDS-PAGE
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
100μl|1ml|2ml
特别提示:包括荧光蛋白上样缓冲液在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:荧光蛋白上样缓冲液
英文名称:Band-Now Pre-Staining Protein Sample Treatment Buffer for SDS-PAGE
产品货号:QN1083
产品规格:100μl|1ml|2ml
荧光蛋白上样缓冲液在电泳前的样品处理阶段对SDS-PAGE的蛋白样品进行预染,标记上荧光。实验完成以后,凝胶中或转膜后的蛋白条可直接通过紫外灯、LED灯或其他数字成像系统进行观察和分析,无需染色脱色。
荧光蛋白上样缓冲液灵敏度高比银染高。稳定性强,背景低。可对所有蛋白进行染色,不影响蛋白的迁移率与电泳图谱。电泳过程中,游离的染料分子与溴酚蓝的迁移速率一致,跑胶结束时 移至凝胶末端,背景干净。荧光蛋白上样缓冲液非常适合用于追踪蛋白表达纯化以及Western blot的SDS-PAGE。
使用步骤:
1. 请在使用前根据管壁标签上的体积加入resuspension buffer重悬。Resuspension buffer在4℃可能会有沉淀产生,室温下放置至沉淀消失。
2. 将用上样缓冲液处理的蛋白样品与待电泳蛋白样品1:2混合。比如,3ul上样缓冲液+6ul蛋白样品。
3. 90~100℃加热上述处理的样品混合液5分钟。细胞或组织样品,加热时间延长至10分钟。确保加热温度>90℃使样品充分受热。
大部分预制胶(Bis-Tris体系除外)可以直接进行下一步。Bis-Tris体系的预制胶(如Life Technology),需加入20%已处理样品体积的Enhancing buffer。比如,10ul已处理的样品需加入2ul Enhancing buffer。
4. 样品可以上样进行电泳了(无需再加Loading Buffer处理)。
5. 电泳结束后,将凝胶放至透射仪上进行观察和拍照。透射仪可以是紫外灯,蓝光LED灯或其它凝胶成像系统。如果光源在可见光波长范畴的无需剥胶,因为可见波长范围内的光可以穿透玻璃或塑料材质的胶板。
6. (可选的)如果有需要,经荧光蛋白上样缓冲液处理的凝胶仍可进行考染。按标准的考染步骤进行即可。
注意事项:
1. 请勿使用该上样缓冲液处理预染的或预处理的蛋白分子量标准。这些产品与荧光蛋白上样缓冲液不兼容。
2. 灵敏度影响因素:高pH(大于7)不会影响染色,低pH则会降低染色的效率,如果样品的pH低于5,建议将pH调整至7以上。
3. 荧光蛋白上样缓冲液不适合在如下SDS-PAGE实验中使用:切割蛋白条带用以测序、质谱分析或抗体制备。
4. 建议-20保存,如果室温放置2-3周,则可添加新的DTT,蛋白条带会重新变得清晰和明亮。添加DTT的终浓度不要超过20mM。也可以添加其他还原剂TCEP(2 mM),效果也很好。
储存条件:-20℃
我公司销售的荧光蛋白上样缓冲液北京厂家,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验外再包一张3mm滤纸(预先用转移缓冲液浸湿),将凝胶夹在中间,保持湿润和没有气泡。 3)将此滤纸/凝胶/薄膜滤纸按照厂家建议方法放入电泳装置中,凝胶面向阴极。 4)将上述装置放入缓冲液槽中,并灌满转移缓冲液以淹没凝胶。 5)按照厂家所示接通电源开始电泳转移。 6)转移结束后,取出薄膜和凝胶,弃去凝胶。 2. 将薄膜漂在氨基黑中快速染色,直至分子量标准显现时取出,记录下标准位置。
案例一:DAB染色后切片着色一片黄/背景深 背景:奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验,许多从北京购买的试剂买不到,对我们的许多实验产生了很大的影响。 我以前一直用中杉金桥的Sp三步法染色试剂盒,效果不错,在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验,第一批组化实验结果很好,抗体浓度感觉比较合适(Santa Cruz公司1:200),等做第二批时发现封闭血清不够了,为了保证实验顺利进行,我又从福州迈新顶了一个SP试剂盒,同时抗体稀释液也不够了,我又重新从博士
(冰上)ddH2O 2.7μl混匀,短暂离心;5.37 ℃ 温浴 1-2 hrs ( 纯 DNA) 或 10 hrs (粗制 DNA );6.加入上样缓冲液终止酶切反应,也可 65 ℃加热 10 min 使酶变性失活;7.电泳检测酶切效率:每个样品取 1/10 量用琼脂糖电泳检测,制胶及点样方法同上。结果分析:若水稻 DNA 呈现均匀连续分布的一片,则酶切效果好,否则需重做;DNA 被切烂: DNA 降解,重新提 DNA ;DNA 切不动:杂质多(多糖
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