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1ml/T25
收到细胞后处理方法:
1. 用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代,一般2到3天换一次液;
2. 待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,传代比例为1:3到1:8;
3.传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间,记录最佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。
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文献和实验为SP细胞。重要的是,这部分细胞虽然只占整个骨髓细胞0.1%,但具有很强的造血干细胞活性,能重建受致死剂量放射线照射的小鼠的髓系和淋巴系血细胞,重建能力是普通骨髓细胞1000倍[2]。继之,在人和猴的骨髓中也发现这种特殊的SP细胞,占成体有核骨髓细胞的比例不足0.1%,但含有高度浓缩的骨髓干细胞成分[3]。 二、SP细胞的生物学特性 迄今,已在多种种属[3,4]和多种组织类型[5-9]中都证实确实存在这种极少量的SP细胞,具备干细胞的多种特性。SP表型可能是成体组织干细胞较具代表性的特征
的突变的结果。对产生危机早的小鼠和仓鼠等确立细胞株比较容易做到,而人胎儿成纤维细胞株的确立是困难的。在进行确立细胞株时,细胞容易发生恶性性状转变,从纯系动物体细胞建立的确立细胞株,对于来源动物(作为细胞株来源的动物)可引起肿瘤的形成。确立细胞株最早是由 W. R. Earle( 1943)从 C3H系小鼠分离出的 L细胞株,其次是 G. O. Gey( 1952)由人子宫癌分离出的海拉( HeLa)细胞。确立细胞株一般说容易培养,增殖能力强,可进行定量处理,所以能在试管内繁殖,用作多细胞生物体的细胞
清,保持细胞培养间洁净和严格无菌操作等。 网友“arlbor”把从网上和书上看到的一些资料与大家讨论一下吧: 细胞株若受到细菌、真菌、支原体、或是特定病毒等之污染时,会严重的影响实验的结果。而细菌、真菌等之微生物污染时,较易自培养基等的外观变化察觉。但是若受到支原体之污染时,细胞之外观较无明显变化,但是其污染会造成细胞之生长速率缓慢、细胞产生病变之型态改变等等变化。 各国细胞库支原体污染的统计表,如下: 国家 受支原体污染(%) 报告年度 USA-FDA 15 1993
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