土壤羟胺还原酶活性检测试剂盒 微量法

土壤羟胺还原酶（S-HR）活性
检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC3015
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	液体5mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×2瓶	2-8℃保存
试剂三	液体15mL×1瓶	2-8℃保存
试剂四	粉剂×1瓶	2-8℃保存
试剂五	液体5mL×1瓶	2-8℃保存
试剂六	液体2.5mL×1瓶	2-8℃保存
试剂七	液体2.5mL×1瓶	2-8℃保存
标准品	粉剂×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取1瓶加入2.5mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂可以2-8℃保存一周；
2. 试剂三：临用前沸水浴中加热15min，开盖10s后立即拧紧盖子，待自然冷却后再使用。使用过程中尽量不要敞口放置，取完立即加盖拧紧。若长期敞口放置，可再次沸水浴10min（盖盖儿）冷却至常温使用；
3. 试剂四：临用前加10mL蒸馏水溶解，此溶液为饱和溶液，取上清使用即可。用不完的试剂2-8℃保存2周；
4. 标准品：临用前加1.028mL蒸馏水充分溶解，制备140μmol/mL盐酸羟胺标准溶液待用，2-8℃保存2周。

产品说明：
土壤羟胺还原酶能将土壤中氮代谢过程中形成的中间产物羟胺还原为氨，土壤中的还原态化合物可作为氢的供体，其强弱影响到土壤氮代谢过程中氮素的氨挥发损失，间接影响氮肥的利用效率。

硫酸铁铵中的Fe³⁺可将羟胺氧化为氮气，自身被还原为Fe²⁺，Fe²⁺在弱酸条件下与邻菲罗啉形成橙红色配合物，在510nm处有吸收峰，羟胺还原酶作用于羟胺，使配合物形成量减少，510nm处吸光值的减少可反映羟胺还原酶的活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、天平、水浴锅、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、30-50目筛、

漩涡震荡仪、氮吹仪、研钵、蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：

1. 土壤表层溶解氧浓度较大，取样应取表层5cm以下的土壤，否则酶活性较低或者测定不到。
2. 当ΔA大于0.5时，建议将样本上清液稀释后再进行测定。
3. 反应体系最好能用氮吹仪排除溶解氧，若无此装置，则加入试剂三后立即密封，于30℃反应1h。

实验实例：

1. 取2管0.02g三叶草土，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定 =（A无基质管-A空白管）-（A测定管-A对照管）=0.38-（0.326-0.116）=0.170，带入标准曲线y=0.0923x+0.0138，计算x=1.6923，按土壤质量计算S-HR酶活得：

S-HR活性（U/g 土样）=0.96x÷W = 81.23 U/g 土样。

1. 取2管0.02g林土，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定=（A无基质管-A空白管）-（A测定管-A对照管）=0.38-（0.316-0.086）=0.150，带入标准曲线y=0.0923x+0.0138，计算x=1.4756，按土壤质量计算S-HR酶活得：

S-HR活性（U/g 土样）=0.96x÷W = 70.829 U/g 土样。
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