- ￥7250
- Solarbio
- 北京
- BC2250
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Phosphoglycerate Kinase(PGK) Activity Assay Kit
- 库存：
99
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC2250-50T/48S
- 规格：
50管/48样
3-磷酸甘油酸激酶（PGK）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2250
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 液体25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×1支 | -20℃保存 |
| 试剂三 | 粉剂×1支 | -20℃保存 |
| 试剂四 | 粉剂×1瓶 | -20℃保存 |
| 试剂五 | 粉剂×3瓶 | -20℃保存 |
溶液的配制：
- 试剂二：临用前加入1mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存4周，禁止反复冻融
- 试剂三：临用前加入2.5 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存4周，禁止反复冻融；
- 试剂四：临用前加入3 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存4周，禁止反复冻融；
- 试剂五：提供一空棕色试剂瓶。临用前取一支试剂五倒入空瓶中并加入10 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存2周，禁止反复冻融（该试剂为冻干试剂，可能存在肉眼观察试剂量相差较大甚至量很少的现象，此现象不影响使用，实际质量相同）；
- 工作液的配制：按照蒸馏水：试剂一：试剂二：试剂三：试剂四：试剂五=1.14mL：1.5mL：0.06 mL：0.15 mL：0.15 mL：0.6 mL（共3.6mL，4T）的比例配制，根据样本量配制，现用现配。
产品说明：
3-磷酸甘油酸激酶（Phosphoglycerate Kinase，PGK，EC.2.7.2.3）是糖酵解的关键酶，也是生物得以生存的关键酶。广泛存在于动植物和微生物体内，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，引起340nm处的吸光度下降，即反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：
- ΔA大于0.8或者A1测定小于0.9时，建议将粗酶液用提取液稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时，可以延长反应时间（10min或15min）或增加样本体积来测定。
- 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。
- 样本的蛋白浓度需自行测定，由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以测定样本蛋白浓度时需扣除提取液自身蛋白浓度。
实验实例：
- 取0.1g白菜加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后再用提取液稀释4倍，之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管=A1测定-A2测定=1.126-0.654=0.472，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.916-0.914=0.002，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.472-0.002=0.47，按样本质量计算酶活得：PGK（U/g 质量）=321.54×ΔA÷W×稀释倍数= 321.54×0.47÷0.1×4=6044.952 U/g 质量。
- 取0.1g小鼠肌肉加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后再用提取液稀释20倍，之后按照测定步骤操作，测得计算，ΔA测定管=A1测定-A2测定= 0.908-0.35=0.558，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.916-0.914=0.002，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.558-0.002=0.556，按样本质量计算酶活得：PGK（U/g 质量）=321.54×ΔA÷W×稀释倍数= 321.54×0.556÷0.1×20=35755. 248 U/g 质量。
- 取骆驼血清样本100uL按照测定步骤直接测定，测得计算，ΔA测定管=A1测定-A2测定= 0.966-0.907=0.059，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.916-0.914=0.002，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.059-0.002=0.057，按液体体积计算酶活得：PGK（U/mL）=321.54×ΔA=321.54×0.057=18.328 U/mL。
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文献和实验度。 （2） 吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 （3） 计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，影响精度的因素较多，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品，如维生素A测定法，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。
蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次，得到吸光度的相对标准偏差。表1 精密度测定结果 2.3 稳定性 取1mg/ml牛 血清 蛋白标准溶液每十分钟测定一次，50分钟内的吸光度变化如下表2。表2 稳定度测定结果 3. 结论该方法测定快速、简便，干扰物少，是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定的紫外分光光度法。
【 实验目的 】 学习紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法 【 实验原理 】 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光，RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。一般在260nm波长下，每1ml含1µg RNA溶液的光吸收值为0.022~0.024，每1m1含1µg DNA溶液的光吸收值约为0.020，故测定未知浓度RNA或DNA
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