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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
Acetokinase(ACK) Activity Assay Kit
- 库存:
99
- 供应商:
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号:
BC3170-50T/48S
- 规格:
50管/48样
乙酸激酶(ACK)活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC3170
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体50 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 液体30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂三 | 粉剂×2瓶 | -20℃保存 |
| 试剂四 | 粉剂×2瓶 | -20℃保存 |
| 试剂五 | 粉剂×1支 | -20℃保存 |
| 试剂六 | 液体95 μL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂七 | 液体110 μL×1瓶 | -20℃保存 |
| 试剂八 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂九 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
- 提取液:临用前将试剂九加入到提取液中,并于2-8℃保存;
- 试剂二:临用前每瓶加入4 mL蒸馏水,充分溶解待用。用不完的试剂仍2-8℃保存;
- 试剂三:临用前每瓶加入3 mL蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂-20℃保存;
- 试剂四:临用前每瓶加入2 mL蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂-20℃保存;
- 试剂五:临用前每支加入1 mL蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂-20℃保存;
- 试剂六:液体置于试剂瓶内EP管中。临用前根据样本量将试剂六、蒸馏水按43:457(V:V)的比例配制备用,现用现配;
- 试剂七:液体置于试剂瓶内EP管中。临用前根据样本量将试剂七、蒸馏水按1:9(V:V)的比例配制备用,现用现配;
- 试剂八:临用前加入5 mL蒸馏水,充分溶解待用。用不完的试剂仍2-8℃保存;
- 工作液:吸取0.3 mL 试剂二、1 mL试剂三、0.65 mL试剂四、0.2 mL试剂五、0.2 mL试剂六、0.2 mL试剂七、1 mL试剂八混匀,也可根据比例现用现配,于冰上备用。
ACK广泛存在于生物体内,催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP,是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶,尤其是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。
测定原理如下:(1)ACK催化乙酸钠和ATP生成乙酰磷酸和ADP,(2)*酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和*酮酸,(3)乳酸脱氢酶催化丙*酸和NADH生成乳酸和NAD+,(4)在340nm下测定NADH氧化生成NAD+
速率,即可反映ACK活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
台式离心机、紫外分光光度计、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项:
- 测定过程中样本和所有试剂在冰上放置,以免变性和失活。
- 比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃,取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水,将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
- ΔA大于1时,建议稀释后测量,注意计算公式乘以稀释倍数;ΔA小于0.01时,建议延长反应时间测量,注意计算公式变化。
- 取0.1g肾脏组织样本,加入1mL提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定=A测定1-A测定2=1.893-1.147=0.746,ΔA空白=A空白1-A空白2=1.453-1.448=0.005,ΔA=ΔA测定-ΔA空白= 0.746-0.005=0.741,按样本质量计算酶活得:
- 取500万大肠杆菌加入1mL提取液超声破碎,离心,取上清后按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定=A测定1-A测定2=1.476-1.448=0.028,ΔA空白=A空白1-A空白2=1.453-1.448=0.005,ΔA=ΔA测定-ΔA空白=0.028-0.005=0.023,按细菌数量计算酶活得:
参考文献:
- Mukhopadhyay S, Hasson M S, Sanders D A. A continuous assay of acetate kinase activity: Measurement of inorganic phosphate release generated by hydroxylaminolysis of acetyl phosphate[J]. Bioorganic chemistry, 2008, 36(2): 65-69.
BC2030/BC2035 异柠檬酸裂解酶(ICL)活性检测检测试剂盒
BC3120/BC3125 植物脱氢酶(PDHA)活性检测试剂盒
BC2010/BC2015 乙醇酸氧化酶(GO)活性检测试剂盒
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文献和实验Research on the Promotion of Sludge Anaerobic Fermentation with Sodium Citrate under Low Concentrations of Polyaluminum Chloride点击查看
| AuthorPuli Zhu, Yilin Wang, Hui Bai, Jing Feng, Rui Zhang, Duo Bu, Zeng Dan, Wei Li, Xuebin Lu | Publish_toFermentation-Basel |
| IF3.7000 | PMID |
一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;在细胞发生凋亡阶段,Caspase被激活,活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后,黄色
度。 (2) 吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液,在规定的波长处测定其吸收度,再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时,应注意仪器的校正和检定。 (3) 计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种,使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时,影响精度的因素较多,故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品,如维生素A测定法,则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。
蛋白的考马斯亮兰溶液连续进样6次,得到吸光度的相对标准偏差。表1 精密度测定结果 2.3 稳定性 取1mg/ml牛 血清 蛋白标准溶液每十分钟测定一次,50分钟内的吸光度变化如下表2。表2 稳定度测定结果 3. 结论该方法测定快速、简便,干扰物少,是目前灵敏度较高的蛋白质含量测定的紫外分光光度法。









