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乙酸激酶(ACK)活性检测试剂盒 紫外分光光度法

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  • ¥1750
  • Solarbio已认证
  • 北京
  • BC3170
  • 2025年07月11日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20℃

    • 保质期

      6个月

    • 英文名

      Acetokinase(ACK) Activity Assay Kit

    • 库存

      99

    • 供应商

      北京索莱宝科技有限公司

    • CAS号

      BC3170-50T/48S

    • 规格

      50管/48样


    乙酸激酶(ACK)活性检测试剂盒说明书
    紫外分光光度法
    注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
    货号BC3170
    规格50T/48S
    产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
    试剂名称 规格 保存条件
    提取液 液体50 mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂一 液体30 mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂二 粉剂×1 2-8℃保存
    试剂三 粉剂×2 -20℃保存
    试剂四 粉剂×2 -20℃保存
    试剂五 粉剂×1 -20℃保存
    试剂六 液体95 μL×1 2-8℃保存
    试剂七 液体110 μL×1 -20℃保存
    试剂八 粉剂×1 2-8℃保存
    试剂九 粉剂×1 2-8℃保存
    溶液的配制:
    1. 提取液:临用前将试剂九加入到提取液中,并于2-8℃保存;
    2. 试剂二:临用前每瓶加入4 mL蒸馏水,充分溶解待用。用不完的试剂仍2-8℃保存;
    3. 试剂三:临用前每瓶加入3 mL蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂-20℃保存;
    4. 试剂四:临用前每瓶加入2 mL蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂-20℃保存;
    5. 试剂五:临用前每支加入1 mL蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂-20℃保存;
    6. 试剂六:液体置于试剂瓶内EP管中。临用前根据样本量将试剂蒸馏水按43:457(V:V)的比例配制备用,现用现配;
    7. 试剂七:液体置于试剂瓶内EP管中。临用前根据样本量将试剂蒸馏水按1:9(V:V)的比例配制备用,现用现配;
    8. 试剂八:临用前加入5 mL蒸馏水,充分溶解待用。用不完的试剂仍2-8℃保存;
    9. 工作液:吸取0.3 mL 试剂二、1 mL试剂三、0.65 mL试剂四、0.2 mL试剂五、0.2 mL试剂六、0.2 mL试剂七、1 mL试剂八混匀,也可根据比例现用现配于冰上备用。
    产品说明:
    ACK广泛存在于生物体内,催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP,是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶,尤其是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。
    测定原理如下:(1)ACK催化乙酸钠和ATP生成乙酰磷酸和ADP,(2)*酸激酶催化ADPPEP生成ATP和*酮酸,(3)乳酸脱氢酶催化丙*酸和NADH生成乳酸和NAD+,(4)在340nm下测定NADH氧化生成NAD+

    速率,即可反映ACK活性。
    注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
    自备的仪器和用品
    台式离心机、紫外分光光度计、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
    操作步骤具体操作步骤详见“产品资料”附件
    注意事项:
    1. 测定过程中样本和所有试剂在冰上放置,以免变性和失活。
    2. 比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃,取小烧杯一只装入一定量的37℃25℃蒸馏水,将此烧杯放入37℃25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
    3. ΔA大于1时,建议稀释后测量,注意计算公式乘以稀释倍数;ΔA小于0.01时,建议延长反应时间测量,注意计算公式变化。
    实验实例:
    1. 取0.1g肾脏组织样本,加入1mL提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定=A测定1-A测定2=1.893-1.147=0.746ΔA空白=A空白1-A空白2=1.453-1.448=0.005ΔA=ΔA测定-ΔA空白= 0.746-0.005=0.741按样本质量计算酶活得
    ACK(U/g 质量)=536×ΔA÷W=536×0.741÷0.1=3971.76 U/g 质量
    1. 500万大肠杆菌加入1mL提取液超声破碎,离心,取上清后按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定=A测定1-A测定2=1.476-1.448=0.028ΔA空白=A1-A空白2=1.453-1.448=0.005ΔA=ΔA测定-ΔA空白=0.028-0.005=0.023按细菌数量计算酶活得
    ACK(U/104 cell)=1.072×ΔA=1.072×0.023=0.0247 U/104 cell。
    参考文献:
    1. Mukhopadhyay S, Hasson M S, Sanders D A. A continuous assay of acetate kinase activity: Measurement of inorganic phosphate release generated by hydroxylaminolysis of acetyl phosphate[J]. Bioorganic chemistry, 2008, 36(2): 65-69.
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    图标文献和实验
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    IF3.7000PMID
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