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乙醇酸氧化酶(GO)活性检测试剂盒 微量法

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  • ¥1950
  • Solarbio已认证
  • 北京
  • BC2015
  • 2025年07月15日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20℃

    • 保质期

      6个月

    • 英文名

      Glycollic Oxidase(GO)Activity Assay Kit

    • 库存

      99

    • 供应商

      北京索莱宝科技有限公司

    • CAS号

      BC1965-100T/48S

    • 规格

      100管/96样

    乙醇酸氧化酶(
    GO)活性检测试剂盒说明书

    微量法
    货号:BC2015
    规格:100T/96S
    产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
    试剂名称 规格 保存条件
    提取液 液体60 mL×2瓶 2-8保存
    试剂一 液体15 mL×1瓶 2-8保存
    试剂二 粉剂×2 -20℃保存
    试剂三 液体2 mL×1瓶 2-8保存
    溶液的配制:
    1. 试剂二:临用前加入2.5 mL双蒸水溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
    产品说明:
    乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.15)是乙醇酸循环中的一种酶,也是植物光呼吸代谢中的关键酶,催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,通过测定乙醇酸氧化酶活性,可以了解植物光合和呼吸代谢的基本方法。
    乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和盐酸苯 肼反应生成乙醛酸苯腙,在324nm有特征吸收峰。
    注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
    需自备的仪器和用品:
    紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板UV板、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
    操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料”附件
    一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
    组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g4℃,离心10min,取上清置冰上待测。
    细胞或细菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
    二、测定步骤
    1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至324nm,紫外分光光度计蒸馏水调零。
    2. 将试剂一25℃预热15min
    3. 样本测定:在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂:
     
    试剂名称 测定管 空白管
    试剂一(μL 130 130
    蒸馏水(μL - 10
    样本(μL 10 -
    试剂二(μL 40 40
    试剂三(μL 20 20
    充分混匀,立即测定324nm处10s190s吸光值A1A2,计算ΔA测定管=A2测定-A1测定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管。空白管只需做1-2次
    注意事项:
    1. 测定之前进行预实验,若吸光值A1>1,请将样本用提取液进行适当的稀释再测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
    2. 色素含量较高的样本,可在提取酶时加活性炭吸附。
    3. 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔,正常情况下,其OD值变化不超过0.02
    实验实例:
    1. 称取约0.1g三叶草组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心10min,取上清进行检测,使用微量石英比色皿测得ΔA测定管=A2测定-A1测定=0.8956-0.7839=0.1117ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0853-0.077=0.0083ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.1117-0.0083=0.1034按样本质量计算酶活得:GO酶活(U/g 质量)=392.16×ΔA÷W=405.4934 U/g 质量
    2. 称取约0.1g菠菜组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心10min,取上清稀释2倍进行检测,使用微量石英比色皿测得ΔA测定管=A2测定-A1测定=0.9286-0.8105=0.1181ΔA空白管=A2白-A1空白=0.0853-0.077=0.0083ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.1181-0.0083=0.1098按样本质量计算酶活得:GO酶活(U/g 质量)=392.16×ΔA÷W×2(稀释倍数)=861.1834 U/g 质量
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