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线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)活性检测试剂盒

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  • ￥870
  • solarbio已认证
  • BC2160
  • 北京
  • 2025年07月12日
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    北京索莱宝科技有限公司
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    • 英文名：

      Isocitrate Dehydrogenase Mitochondrial(ICDHm) Activity Assay Kit

    • CAS号：

      BC2160-50T/24S

    • 保质期：

      6个月

    • 供应商：

      北京索莱宝科技有限公司

    • 保存条件：

      -20℃

    • 规格：

      50管/24样


    线粒体异柠檬酸脱氢酶（ICDHm）活性检测试剂盒说明书
    可见分光光度法
    货号：BC2160
    规格：50T/24S
    产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
    试剂名称 规格 保存条件
    提取液一 液体45 mL×1瓶 2-8℃保存
    提取液二 液体600 μL×2支 -20℃保存
    提取液三 液体40mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂一 液体10mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂二 液体10mL×1瓶 常温保存
    试剂三 粉剂×2支 -20℃保存
    试剂四 液体10 mL×1瓶 常温保存
    试剂五 液体35 mL×1瓶 常温保存
    标准品 粉剂×1支 2-8℃保存
    溶液的配制：
    1. 提取液二：易挥发试剂，用完后盖紧盖儿后及时放回-20℃保存；
    2. 试剂三：临用前加入0.75 mL蒸馏水，充分溶解待用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；
    3. 标准品：10 mg α-酮戊二酸。临用前加入684 μL蒸馏水，配成100 μmol/mL标准液，2-8℃保存8周；
    4. 工作液的配制：临用前根据用量将试剂一、试剂二按1:1比例混合，现配现用。
    产品说明：
    线粒体异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase，ICDHm），广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，与线粒体基因表达及线粒体其他的功能有关。异柠檬酸脱氢酶在生物体内有两种存在形式，以NAD为辅酶的NAD-依赖型异柠檬酸脱氢酶，和以NADP为辅酶的NADP-依赖型异柠檬酸脱氢酶。
    异柠檬酸脱氢酶的主要功能，是在体内三羧酸循环中，催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸，将NAD还原成NADH，通过测定α-酮戊二酸的生成量，可以计算出线粒体异柠檬酸脱氢酶活力高低。

    注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
    需自备的仪器和用品：
    低温离心机、可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
    操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
    注意事项：
    1. 为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于1），可用提取液三稀释
    上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。
    1. 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活，若用样本质量计算，则需加测胞浆提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方为总酶活。
    2. 测定蛋白浓度时，由于试剂一本身含有蛋白（约1mg/mL），所以测定时需扣除此部分蛋白。
    3. 附：使用样本重量计算公式
    A、上清（胞浆）中ICDHm活力计算：
    按样本质量计算
    酶活定义：每g组织在反应体系中每分钟产生1 nmol α-酮戊二酸定义为一个酶活性单位。
    ICDHm活性（U/g 质量）=x×V样÷(W×V样÷V提取)÷T×103=25.25×x÷W
    V提取：加入提取液体积，1.515mL；V样：加入上清液体积，0.2mL；W：样本质量，g；T：反应时间，1h=60min；103：单位换算系数，1μmol =103nmol。
    B、沉淀（线粒体）中ICDHm活力计算：
    按样本质量计算
    酶活定义：每g组织在反应体系中每分钟产生1 nmol α-酮戊二酸定义为一个酶活性单位。
    ICDHm活性（U/g 质量）=x×V样÷(W×V样÷V提取)÷T×103=10.1×x÷W
    V提取：沉淀重悬时加入提取液体积，0.606mL；V样：加入上清液体积，0.2mL；W：样本质量，g；T：反应时间，1h=60min；103：单位换算系数，1μmol =103nmol。
    C、样本ICDHm总活力计算：
    样本ICDHm总活力即为上清（胞浆）中ICDHm活力与沉淀（线粒体）中ICDHm活力之和。
    按样本质量计算：ICDHm（U/g 质量）=25.25×x÷W+10.1×x÷W
    实验实例：
    1. 取0.3g小鼠肾脏加入1.5mL提取液一和15μL提取液二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。4℃，1000g离心10min。将上清液移至另一离心管中，4℃，11000g离心15min。上清液即胞浆提取物，在沉淀中加入600μL提取液三和6μL提取液二，超声波破碎，4℃，10000g离心10min，取上清液，分别按操作步骤检测，测得：胞浆ΔA测定=A测定管-A对照管=0，线粒体ΔA测定=A测定管-A对照管=0.767-0.475=0.292，带入标准曲线y=1.0917x+0.0471计算相应的x值，按样本质量计算酶活得：
    胞浆中ICDHm活性（U/g质量）=25.25×x÷W=0 U/g质量
    线粒体中ICDHm活性（U/g质量）=10.1×x÷W=7.55 U/g质量
    样本总ICDHm（U/g 质量）=25.25×x÷W+10.1×x÷W=7.55 U/g质量。
     
    1. 取0.3g小化眉加入1.5mL提取液一和15μL提取液二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。4℃，1000g离心10min。将上清液移至另一离心管中，4℃，11000g离心15min。上清液即胞浆提取物，上清液稀释2倍，在沉淀中加入600μL提取液三和6μL提取液二，超声波破碎，4℃，10000g离心10min，取上清液稀释2倍，分别按操作步骤检测，测得：胞浆ΔA测定=A测定管-A对照管=0，线粒体ΔA测定=A测定管-A对照管=0.635-0.487=0.148，带入标准曲线y=1.0917x+0.0471计算相应的x值，按样本质量计算酶活得：
    胞浆中ICDHm活性（U/g质量）=25.25×x÷W×2=15.49U/g质量
    线粒体中ICDHm活性（U/g质量）=10.1×x÷W×2=2.28 U/g质量
    样本总ICDHm（U/g 质量）=25.25×x÷W×2+10.1×x÷W×2=15.49 U/g质量。
    相关发表文献：
    Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, et al. lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma. International Journal of Oncology. May 2018;(IF3.571)
    参考文献：
    Igamberdiev A U, Gardeström P. Regulation of NAD-and NADP-dependent isocitrate dehydrogenases by reduction levels of pyridine nucleotides in mitochondria and cytosol of pea leaves[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics, 2003, 1606(1-3): 117-125.
    相关系列产品：
    BC0710/BC0715  α-酮戊二酸脱氢酶（α-KGDH）活性检测试剂盒
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    图标文献和实验
    该产品被引用文献
    SUCLG2 Regulates Mitochondrial Dysfunction through Succinylation in Lung Adenocarcinoma点击查看
    AuthorQifan Hu, Jing Xu, Lei Wang, Yi Yuan, Ruiguang Luo, Mingxi Gan, Keru Wang, Tao Zhao, Yawen Wang, Tianyu Han, Jian-Bin WangPublish_toAdvanced Science
    IF15.1000PMID37904651
    相关实验

    • 实验动物器官中脱氢酶活性

      8 〃 3.6±1.4 　 　 　 谷氨酸脱氢酶 〃 〃 8 〃 31.8±3.0 　 　 　 〃 豚鼠 350～400 8 〃 57.2±2.4 　 　 　 〃 〃 〃 8 　 　 6.3±0.3 　 　 异柠檬酸脱氢酶 大鼠 120～150 7 微克/克蛋白/20分 6.8±2.1 　 　 9.5±1.1 〃 〃 60～70 8 毫克分子/克蛋白 51.8±2.7 97.8±4.0 　 　 〃 〃 160～200 8 〃 　 　 295±11 　 a-酮戊二酸脱氢酶 小鼠 18～20 120

    • 表达蛋白的生物学活性的检测

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