果胶酶活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC2630
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体40 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
试剂一A |
粉剂×1支 |
2-8℃保存 |
试剂一B |
液体40 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
试剂二 |
液体40 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
标准品 |
粉剂×1支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:将试剂一A倒入试剂一B于50℃水浴中溶解(期间可拿出振荡数次)。该试剂易长菌,配制完成后可-20℃分装保存,可保存12周。
2、 标准品:10mg半乳糖醛酸。临用前加入0.943mL蒸馏水,配成50μmol/mL的标准液。
产品说明:
果胶酶(pectinase)是分解果胶的酶类,包括原果胶酶,果胶酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类,广泛存在于高等植物果实和微生物中,是水果加工中最重要的酶。
果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质,测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:具体的操作步骤请见“产品资料”文件
注意事项:
1、 A大于1.5时,建议将样本用提取液稀释后再进行测定。
2、 植物果实组织建议将样本稀释10倍或20倍后再测定。
实验实例:
1. 0.1g猕猴桃加入1mL提取液进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上稀释10倍后按照测定步骤操作,测得计算ΔA= A测定管-A对照管=1.465-1.45=0.015,依据标准曲线y=0.2575x-0.2214,计
算得x=0.918μmol/mL,按样本质量计算酶活得:
果胶酶活性(U/g质量)=2x÷W×10(稀释倍数)= 183.6 U/g质量。
相关发表文献:
[1] Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Transcription factor VmSeb1 is required for the growth, development, and virulence in Valsa mali. Microbial Pathogenesis. October 2018;132-138.(IF2.581)
[2] Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Two members of the velvet family,VmVeA and VmVelB,affect conidiation,virulence and pectinase expression in Valsa mali. Molecular Plant Pathology. November 2017;(IF4.379)
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