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花青素还原酶(ANR)活性检测试剂盒 微量法

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  • ¥5650
  • Solarbio已认证
  • 北京
  • BC4095
  • 2025年07月16日
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    • 详细信息
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    • 保存条件

      -20℃

    • 保质期

      6个月

    • 英文名

      Anthocyanidin Reductase Activity Assay Kit

    • 库存

      99

    • 供应商

      北京索莱宝科技有限公司

    • CAS号

      BC4095-100T/48S

    • 规格

      100管/48样


    花青素还原酶(ANR)活性检测试剂盒说明书
    微量法
    货号:BC4095
    规格:100T/48S
    产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
    试剂名称 规格 保存条件
    提取液 液体50 mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂一 液体25 mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂二 粉剂×2 2-8℃保存
    试剂三 粉剂×1 -20℃保存
    试剂四 液体1 mL×1支 2-8℃保存
    溶液的配制:
    1. 提取液:内含不溶物,使用前摇匀。
    2. 试剂二:临用前加入1mL蒸馏水备用-20℃可分装保存4周,避免反复冻融
    3. 试剂三:粉剂置于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入1 mL乙醇和1 mL蒸馏水混匀溶解备用。可以分装后-20保存4,避免反复冻融。
    产品说明:
    花青素还原酶(ANR)是原花青素生物合成途径中的关键酶,使花色素转变为相应的顺式黄烷-3-醇,在植物体内起着非常重要的调控作用。
    NADPH在ANR作用下将花色素转化为黄烷-3-醇和NADP,在340nm下测定NADPH的减少速率,即可反映ANR活性。

    注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
    需自备的仪器和用品:
    紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96UV板、研钵/匀浆器、乙醇、冰和蒸馏水。
    操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料”附件
    一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
    1、组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心15分钟,取上清,置冰上待测。
    2、细胞或细菌样本的制备:先收集细胞或细菌样本到离心管内,弃上清,按照每500万细胞或细菌加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率200w,超声3s,间隔10s,重复30次)。12000g4℃离心15min,取上清,置冰上待测。
    二、测定步骤
     
    1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至340nm紫外分光光度计蒸馏水调零。
    2. 加样表:
    试剂名称(μL 测定管 对照管
    试剂一 170 170
    试剂二 10 10
    试剂三 5 5
    样本 10 -
    上述试剂混匀后37水浴反应30min。
    试剂四 5 5
    样本 - 10
    混匀后测量测定管和对照管在340nm下的吸光度,分别记为A测定管、A对照管,计算ΔA=A对照管-A测定管。

    注意事项:
    1. ΔA大于0.4或者A对照管大于196UV板为ΔA大于0.2或者A对照管大于1)时,建议将反应混合液用试剂一稀释更大倍数或者减少加入的样本体积进行测定;ΔA过小时,可以增加酶促反应时间(45min60min)或增加加入的样本体积来测定。
    2. 加入试剂四后,请在15min内测定完成。
    3. 样本蛋白浓度另行测定。
    实验实例:
    1. 取0.1g苹果加入1mL提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,使用微量石英比色皿测得计算ΔA=A对照管-A测定管=0.9333-0.8095=0.1238,使用微量石英比色皿按样本质量计算酶活得ANR酶活(U/g质量)=107.18×ΔA÷W=107.18×0.1238÷0.1=132.69 U/g 质量。
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