- ￥740
- Solarbio
- 北京
- BC0480-50T/24S
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Soil FDA Hydrolase Activity Assay Kit
- 库存：
现货
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC0480-50T/24S
- 规格：
50T/24S
土壤FDA水解酶活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0480
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
| 试剂一 |
液体30 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂二 |
粉剂×2支 |
-20℃保存 |
| 标准品 |
粉剂×1瓶 |
-20℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前取1支加1.5 mL丙*溶解，用不完的-20℃分装保存一周，避免反复冻融；
2、 标准品：10 mg荧光素，临用前加入3.03 mL 50%丙*（丙*（V）：蒸馏水（V）=1:1）配成10 μmol/mL的荧光素标准溶液，可45℃水浴促进溶解，-20℃分装保存两周，避免反复冻融。
产品说明：
FDA水解反应能很好的反应土壤中微生物活性和土壤质量的变化以及生态系统中有机质的转化，是土壤质量研究中的重要生物学指标之一。
FDA是一种无色化合物，在介质中能被许多土壤酶所催化水解，并经脱水反应，产生酶解终产物荧光素，稳定不易被分解，并在490nm处有强吸收峰，通过检测490nm处的吸光值变化可计算得FDA水解酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、台式离心机、恒温水浴锅/恒温培养箱、丙*（不可快递）、研钵、30-50目筛。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。（土样要求参考注意事项1.）
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min，调节波长至490nm，50%丙*调零。
2、 标准溶液的稀释：取200μL 10μmol/mL荧光素标准液，加入800μL 50%丙*，充分混匀，配制成2μmol/mL标准液待测（即标准管）；取1mL 50%丙*作为0μmol/mL标准液待测（即空白管），现用现配。（实验中每管需要1mL）。
3、 分别吸取标准液1mL于1mL玻璃比色皿中，测定490nm下的吸光度，记为A标准、A空白。计算ΔA标准=A标准-A空白。（空白管和标准管只需测定1-2次）。
4、 样本测定
| 加入试剂（μL） |
对照管 |
测定管 |
| 样本（g） |
0.1 |
0.1 |
| 试剂一 |
500 |
500 |
| 丙* |
450 |
- |
| 试剂二 |
50 |
50 |
| 充分混匀，置于37℃恒温水浴锅或37℃恒温培养箱中，准确反应1h，期间每隔10min震荡一次。 |
||
| 丙* |
- |
450 |
| 10000g，25℃，离心5min，取上清于1mL玻璃比色皿中，测定490nm处吸光值A，分别记为A测定、A对照。计算ΔA测定=A测定-A对照。 |
||
三、FDA水解酶活性计算
酶活性定义：每克土壤每天产生1μmol 荧光素的量为一个酶活力单位。
FDA活性（U/g 土样）=（ΔA测定÷ΔA标准×C标准品）×V反总÷W ÷T=48×（ΔA测定÷ΔA标准）÷W
C标准品：标准品浓度 2μmol/mL；V反总：反应总体积，1mL；W：样本质量，g；T：反应时间，1h=1/24d。
注意事项：
1. 尽量采用新鲜土样或者短期低温保存样本，否则很难准确反映酶的活性。
2. 测定之前进行预实验，若吸光值大于1.2，可适当减少土样质量再测定。若吸光值过小，可增加土样质量或增加反应时间来进行测定。
实验实例：
1、 分别取两管0.1g三叶草土于1.5mLEP管中，分别为对照管及测定管，按照测定步骤操作，取上清稀释5倍进行测定，用1mL玻璃比色皿测定吸光值，计算ΔA测定=A测定-A对照=1.148-0.066=1.082，ΔA标准=A标准-A空白=0.499-0=0.499，按土壤质量计算酶活得：
FDA活性（U/g 土样）=48×（ΔA测定÷ΔA标准）÷W×5（稀释倍数）= 5204.01 U/g 土样。
2、 分别取两管0.1g林土于1.5mLEP管中，分别为对照管及测定管，按照测定步骤操作，取上清稀释5倍进行测定，用1mL玻璃比色皿测定吸光值，计算ΔA测定= A测定-A对照=0.973-0.133=0.84，ΔA标准=A标准-A空白=0.499-0=0.499，按土壤质量计算酶活得：
FDA活性（U/g 土样）=48×（ΔA测定÷ΔA标准）÷W×5（稀释倍数）= 4040.08 U/g 土样。
参考文献：
[1] Sánchez-Monedero M A, Mondini C, Cayuela M L, et al. Fluorescein diacetate hydrolysis, respiration and microbial biomass in freshly amended soils[J]. Biology and Fertility of Soils, 2008, 44(6): 885-890.
[2] Paudel B R, Udawatta R P, Anderson S H. Agroforestry and grass buffer effects on soil quality parameters for grazed pasture and row-crop systems[J]. Applied Soil Ecology, 2011, 48(2): 125-132.
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文献和实验|
AuthorXuan Meng, Lin Wang, Ning Zhao, Delong Zhao, Yongli Shen, Yuan Yao, Wenjie Jing, Shuli Man, Yujie Dai, Yanjun Zhao
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Publish_toActa Biomaterialia
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IF9.7000
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PMID37343908
|
一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色
(7)式或(9)式可计算叶绿素总量。 叶绿体色素的提取液中除含有叶绿素a与b外，还含有叶黄素和胡萝卜素，因为叶黄素和胡萝卜素的吸收光谱均在蓝光区，故不会干扰叶绿素含量在红光区的分光光度法测定。 器材与试剂 722分光光度计，叶绿体色素提取所需器材。 方法与步骤 1. 提取叶绿素。 2. 测定光密度。 在1cm比色杯中，注入叶绿素提取液(浓度大时需稀释)。另以叶绿素提取介质作为参比溶液注入同样的比色杯中。根据实验要求，选用相应的波长(测总量选用652nm，测叶绿素a、b含量
度。 （2） 吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 （3） 计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，影响精度的因素较多，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品，如维生素A测定法，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。
