二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）活性检测试剂盒

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0445
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体100 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂一	液体25 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×1瓶	-20℃保存
试剂三	粉剂×2支	-20℃保存
试剂四	粉剂×1支	-20℃保存

溶液的配制：

1. 试剂三：临用前加入0.5 mL蒸馏水充分溶解待用，振荡溶解后若出现浑浊可以离心使用；
2. 试剂四：临用前加入1 mL 蒸馏水充分溶解待用；
3. 工作液的配制：临用前在试剂二中加入全部试剂一，充分混匀，在25℃孵育5min。

产品说明：
1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（Rubisco, EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着CO₂的固定，同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。
在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1,5-二磷酸（RuBP）与1分子的CO₂结合，产生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA）；PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，伴随着NADH氧化生成NAD⁺；在340 nm NADH有特征吸收峰，而NAD⁺没有此吸收峰，因此测定340nm吸光度下降速率可以代表Rubisco的羧化酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测

需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水

操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件

实验实例：

1. 取0.1g植物叶片，加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算ΔA测定管= A1测定-A2测定=1.2647-1.1825=0.0822，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.8649-0.8502=0.0147，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.0822-0.0147=0.0675，按样本质量计算酶活得：

Rubisco活力（U/g 质量）=344×ΔA÷W=344×0.0675÷0.1=232.2 U/g 质量。

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