血磷浓度检测试剂盒 微量法

血磷浓度检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1655
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	液体110 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×2瓶	2-8℃保存
试剂三	粉剂×2瓶	2-8℃保存
标准液	液体1 mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取1瓶加入1 mL蒸馏水溶解，再缓慢加272 μL浓硫酸，用不完的试剂2-8℃保存一周；
2. 试剂三：临用前取1瓶加入5.5 mL蒸馏水充分溶解，再加入0.8 mL试剂二，充分混合，用不完的试剂2-8℃保存3天；
3. 标准液：10 mmol/L磷标准液。

产品说明：
血磷主要指血中的无机磷，以无机磷盐的形式存在。血浆中钙、磷浓度关系密切，在以mg/dL表示时，二者的乘积(［Ca］×［P］)为30～40。当(［Ca］×［P］)>40，则钙和磷以骨盐形式沉积于骨组织；若(［Ca］×［P］)<35则妨碍骨的钙化，甚至可使骨盐溶解，影响成骨作用。血钙和血磷含量的相对稳定依赖于钙、磷的吸收与排泄和钙化及脱钙两种代谢的相对平衡。上述平衡受到维生素D3、甲状旁腺素和降钙素等激素的调节。
去除血清中有机磷后，无机磷盐与钼酸铵试剂生成磷钼酸，被硫酸亚铁还原后呈蓝色，在660nm有光吸收；通过测定660nm吸光度，计算血液中磷含量。

技术指标：
最低检出限：0.0115 mmol/L
线性范围：0.015625-5 mmol/L
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液枪、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

血清预处理：吸取50μL血清，加950μL试剂一，混匀后8000rpm，室温离心10min，取上清液，待测。
二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，分光光度计蒸馏水调零。
2. 标准溶液的稀释：取100μL 10 mmol/L无机磷，加入900μL蒸馏水，充分混匀，配制成1 mmol/L标准液使用，现用现配。（实验中每管需要50μL，为减小实验误差，故配制大体积。）
3. 样本测定：在1.5mLEP管或96孔板中依次加入以下试剂

试剂名称（μL）	空白管	标准管	测定管
标准液	-	50	-
上清液	-	-	50
蒸馏水	50	-	-
试剂一	50	50	50
试剂三	100	100	100
涡旋混匀，室温静置10min，于660 nm测定吸光度，分别记为A空白管、A标准管、A测定管。空白管和标准管只需测1-2次。注意：需在40min内完成比色。

实验实例：

1. 取鸭血清按照测定步骤操作，使用96孔板测得A测定管=0.806，A空白管=0.056，A标准管=0.539，计算得：血磷含量（mmol/L）=20×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)=31.06 mmol/L。

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