- ￥1300
- Solarbio
- 北京
- BC2305
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Alkali Proteinase(AKP) Activity Assay Kit
- 库存：
99
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC2305-100T/48S
- 规格：
100管/48样
碱性蛋白酶（AKP）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC2305
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体55mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂三 | 液体20mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂四 | 液体4mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 标准品 | 液体1mL×1支 | 2-8℃保存 |
- 试剂一：临用前加入4mL蒸馏水，充分溶解；2-8℃保存8周。
- 试剂二：临用前取1瓶加入4mL提取液，沸水浴中搅拌溶解；2-8℃保存8周。
- 标准品：20μmol/mL标准酪氨酸。
AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类，属于丝氨酸蛋白酶。此外，该酶还能够水解酯键、酰胺键，具有转酯及转肽的功能。该酶是主要工业用酶之一，广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。
在碱性条件下，AKP水解酪蛋白生成酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝；钨蓝在680nm有特征吸收峰，测定680nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
研钵/匀浆器、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP管和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待测。
二、测定步骤
- 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。
- 试剂一、试剂二和试剂三置于40℃水浴保温30min以上。
- 标准溶液的配制：临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL 标准溶液使用，现用现配。
- 样本测定：(1.5mLEP管中分别加入下列试剂)
| 试剂名称（µL） | 对照管 | 测定管 | 空白管 | 标准管 |
| 粗酶液 | 20 | 20 | - | - |
| 试剂一 | 40 | - | ||
| 试剂二 | - | 40 | ||
| 混匀后40℃水浴保温10min | ||||
| 试剂一 | - | 40 | ||
| 试剂二 | 40 | - | ||
| 混匀后10000rpm 4℃离心10min，取上清 | ||||
| 上清 | 40 | 40 | - | - |
| 蒸馏水 | - | - | 40 | - |
| 标准品 | - | - | - | 40 |
| 试剂三 | 200 | 200 | 200 | 200 |
| 试剂四 | 40 | 40 | 40 | 40 |
| 混匀后40℃水浴保温20min | ||||
并计算ΔA测定=A测定管-A对照管、ΔA标准=A标准管-A空白管。空白管和标准管只需做1-2次
注意事项：
若反应较弱，（A测定管-A对照管）差值较小，可适当延长反应时间（20-30min），即第一步水浴时间，最后计算酶活时对公式进行修改。
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文献和实验| AuthorZhijun Cao, Yuxia Liu, Siliang Chen, Wenxin Wang, Zhongcheng Yang, Ya Chen, Shixuan Jiao, Wanqiu Huang, Lianru Chen, Lidan Sun, Zheng Li, Luyong Zhang | Publish_toBIOCHEMICAL PHARMACOLOGY |
| IF5.8000 | PMID37567318 |
内产物的生成量。由于酶促反应速度可随时间的推移而逐渐降低其增加值，所以，为了正确测得酶活力，就必须测定酶促反应的初速度。 碱性蛋白酶在碱性条件下，可以催化酪蛋白水解生成酪氨酸。酪氨酸为含有酚羟基的氨基酸，可与福林试剂 （磷钨酸与磷钼酸的混合物）发生福林酚反应。（福林酚反应：福林试剂 在碱性条件下极其不稳定，容易定量地被酚类化合物还原，生成钨蓝和钼蓝的混合物，而呈现出不同深浅的蓝色。）利用比色法即可测定酪氨酸的生成量，用碱性蛋白酶在单位时间内水解酪蛋白产生的酪氨酸的量来表示酶活
条件。 能够生产蛋白酶的微生物是很多的。放线菌、细菌和霉菌等大家族中的许多成员，在生长繁殖和新陈代谢过程中都能产生蛋白酶，我们分别把它们称为放线菌蛋白酶、细菌蛋白酶和霉菌蛋白酶。如按它们作用最适酸碱度，又可分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。 蛋白酶是用量最多的微生物酶之一。从工农业生产到日常生活，从医学卫生到饮料食品，到处都有它们的踪迹。比如猪、牛、羊皮制革时，首先要除去皮上的毛，然后才能进行加工鞣制成革。过去一直沿用灰碱法脱毛，工序复杂，操作繁重，是有名的脏、累、臭行业。自采用
氧化物。我国目前的添加物是过碳酸钠。这类洗衣粉在60℃以上的热水中洗涤时能放出活泼氧，对织物上的污迹产生漂白作用，但不宜在高温下用来洗涤有色衣物。 加酶洗衣粉 加酶洗衣粉除了含有洗衣粉中的化学成分外，还含碱性蛋白酶。在人体分泌的皮脂中，蛋白质含量高达30％，这些蛋白质比较牢固地附着在衣物上，普通的洗衣粉不容易洗掉。碱性蛋白酶能水解蛋白质的肽键，生成水溶性的氨基酸，氨基酸容易被水洗掉。加酶洗衣粉不宜久存，一年左右就失效。 增白洗衣粉 增白洗衣粉里添加了荧光增白剂。当这种
