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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
4℃保存
- 保质期:
6个月
- 英文名:
Soil Cellulase(S-CL) Activity Assay Kit
- 库存:
99
- 供应商:
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号:
BC0150-50T/24S
- 规格:
50管/24样
可见分光光度法
货号:BC0150
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 试剂一 | 液体10 mL×1瓶(自备) | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 液体15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂三 | 液体50 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂四 | 液体15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
- 试剂一:自备甲苯;
- 标准品:含10 mg无水葡萄糖(干燥失重<0.2%)。临用前加入1 mL蒸馏水溶解,配制成10 mg/mL葡萄糖溶液备用,2-8℃可保存两周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。
S-CL主要来源于土壤微生物,S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。本产品采用3,5-二硝基水杨酸法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、30~50目筛、研钵、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50目筛。
二、测定步骤
- 分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
- 标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mg/mL。
- 标准品稀释表:
| 序号 | 稀释前浓度(mg/mL) | 标准液体积(µL) | 蒸馏水体积(µL) | 稀释后浓度(mg/mL) |
| 1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
| 2 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
| 3 | 1 | 120 | 80 | 0.6 |
| 4 | 1 | 80 | 120 | 0.4 |
| 5 | 1 | 40 | 160 | 0.2 |
| 6 | 1 | 20 | 180 | 0.1 |
4、操作表(在EP管中依次加入下列试剂)
| 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 | |
| 风干土样(g) | 0.25 | 0.25 | - | - |
| 试剂一(μL) | 125 | 125 | - | - |
| 煮沸15min(盖紧) | 振荡混匀,室温放置15min | - | - | |
| 试剂二(μL) | 250 | 250 | - | - |
| 试剂三(μL) | 1000 | 1000 | - | - |
| 蒸馏水(μL) | 250 | 250 | - | - |
| 振荡混匀,40℃水浴糖化1h 后,煮沸15min(盖紧,防止水分散失),10000rpm常温离心10min,取上清得糖化液。 | ||||
| 糖化液(μL) | 50 | 50 | - | - |
| 标准液(μL) | - | - | 50 | - |
| 蒸馏水(μL) | - | - | - | 50 |
| 试剂四(μL) | 150 | 150 | 150 | 150 |
| 混匀, 沸水浴中煮沸显色15min(盖紧,防止水分散失),冷却 | ||||
| 蒸馏水(μL) | 1050 | 1050 | 1050 | 1050 |
| 混匀,冷却后,取1000μL至1mL玻璃比色皿,测定540nm下吸光值A,分别记为A对照管、A测定管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管设定一个对照管。空白管和标准曲线只需做1-2次。 | ||||
1、标准曲线的建立:
以标准溶液浓度(y)为纵坐标,吸光度ΔA标准(x)为横坐标建立标准曲线y=kx+b。根据标准曲线,将ΔA测定带入公式中(x)计算样本浓度y(mg/mL)。
2、S-CL酶活计算:
单位的定义:每天每g土样中产生1mg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
S-CL酶活(U/g 土样)=y×V反总÷W÷T =156×y
T:反应时间,1h=1/24d;V反总:反应体系总体积,1.625mL;W:样本质量,0.25g。
注意事项:
若样本测定管吸光度过小(0.02),可延长反应时间,即40℃水浴糖化时间,最后计算时加以换算即可。
参考文献:
- Deng S P, Tabatabai M A. Cellulase activity of soils[J]. Soil Biology and Biochemistry, 1994, 26(10): 1347-1354.
- Sinegani A A S, Sinegani M S. The effects of carbonates removal on adsorption, immobilization and activity of cellulase in a calcareous soil[J]. Geoderma, 2012, 173: 145-151.
BC0280/BC0285 土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性检测试剂盒
BC0110/BC0115 土壤多酚氧化酶(S-PPO)活性检测试剂盒
BC0120/BC0125 土壤脲酶(S-UE)活性检测试剂盒
BC0140/BC0145 土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性检测试剂盒
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文献和实验| AuthorJing Liu, Tieguang He, Zhixing Yang, Shirui Peng, Yanhuan Zhu, Hong Li, Dan Lu, Qiaoxian Li, Yaxuan Feng, Kuiyuan Chen, Yanyan Wei | Publish_toSCIENCE OF THE TOTAL ENVIRONMENT |
| IF9.8000 | PMID38224887 |
发光基团pNA游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm 或400nm)测定其吸光值,通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1.准备工作: A、 裂解液溶解后混匀,冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备:每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT,冰浴备用。 2.样本处理: A、悬浮细胞 1) 诱导完成后的细胞,2000 rpm离心5 min,弃上清,收集细胞,PBS轻轻重悬细胞并计数
(7)式或(9)式可计算叶绿素总量。 叶绿体色素的提取液中除含有叶绿素a与b外,还含有叶黄素和胡萝卜素,因为叶黄素和胡萝卜素的吸收光谱均在蓝光区,故不会干扰叶绿素含量在红光区的分光光度法测定。 器材与试剂 722分光光度计,叶绿体色素提取所需器材。 方法与步骤 1. 提取叶绿素。 2. 测定光密度。 在1cm比色杯中,注入叶绿素提取液(浓度大时需稀释)。另以叶绿素提取介质作为参比溶液注入同样的比色杯中。根据实验要求,选用相应的波长(测总量选用652nm,测叶绿素a、b含量
度。 (2) 吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液,在规定的波长处测定其吸收度,再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时,应注意仪器的校正和检定。 (3) 计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种,使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时,影响精度的因素较多,故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品,如维生素A测定法,则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。










