还原型谷胱甘肽（GSH）测试盒 （微量法）

还原型谷胱甘肽（GSH）含量检测试剂盒说明书
   微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1175
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	液体110 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	液体20 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂三	液体5 mL×1瓶	2-8℃保存
标准品	粉剂×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 标准品：10mg还原型谷胱甘肽（GSH）。临用前加入1mL蒸馏水溶解，浓度为10mg/mL。2-8℃可以保存6周。

产品说明：
谷胱甘肽是由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）组成的天然三肽，是一种含巯基（-SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基 苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-*甲酸和谷胱甘肽二硫化物（*）。2-硝基-5-*甲酸为黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。


技术指标：
最低检出限：3.763 μg/mL
线性范围：12.5-400 μg/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计或酶标仪、分析天平、匀浆器/研钵/细胞超声破碎仪、低温离心机、水浴锅、移液器、微量玻璃比色皿或96孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：

1. 若不确定样本中GSH含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。
2. 因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白含量，需另取组织。
3. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

实验实例：

1. 取0.1002g大鼠肝脏加入1mL试剂一进行匀浆研磨，取上清之后按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算∆A=A测定-A空白=0.573-0.097=0.476，标准曲线y = 0.0031x - 0.0117，R²=0.9989，x=157.323，按样本质量计算得：

GSH含量（μg/g 质量）=x÷W=1570.09 μg/g 质量。

1. 取0.1014g韭菜叶片加入1mL试剂一进行匀浆研磨，取上清之后按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算∆A=A测定-A空白=0.117-0.097=0.020，标准曲线y = 0.0031x - 0.0117，R²=0.9989，x=10.226，按样本质量计算得：

GSH含量（μg/g 质量）=x÷W=100.85 μg/g 质量。

1. 取0.5mL鸡血清加入0.5mL试剂一，取上清之后按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算∆A=A测定-A空白=0.127-0.097=0.03，标准曲线y = 0.0031x - 0.0117，R²=0.9989，x=13.452，按样本体积计算得：

GSH含量（μg/mL）=2x=26.90 μg/mL。
相关发表文献：

1. Fangzhou Chen, Ying Zhao,Huizhao Chen. MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimer's disease mice. International Journal of Molecular Medicine.October 2018;91-102.(IF2.784)
2. Ming Song, Fangfang Chen, Yihui Li,et al. rimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin-induced skeletal muscle injury. Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle. November 2017;(IF10.754)
3. Hua Li, Lanying Wang, Yanping Luo. Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (−)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan. Molecules. October 2018;(IF3.06)
4. OuYang Q, Tao N, Zhang M. A damaged oxidative phosphorylation mechanism is involved in the antifungal activity of citral against Penicillium digitatum[J]. Frontiers in microbiology, 2018, 9: 239.
5. Chen Z Y, Wang Y T, Pan X B, et al. Amelioration of cold-induced oxidative stress by exogenous 24-epibrassinolide treatment in grapevine seedlings: Toward regulating the ascorbate–glutathione cycle[J]. Scientia horticulturae, 2019, 244: 379-387.
6. GongSun X, Zhao Y Q, Jiang B, et al. Inhibition of MUC1‐C regulates metabolism by AKT pathway in esophageal squamous cell carcinoma[J]. Journal of cellular physiology, 2019, 234(7): 12019-12028.

参考文献：

1. Alpert A J, Gilbert H F. Detection of oxidized and reduced glutathione with a recycling postcolumn reaction[J]. Analytical biochemistry, 1985, 144(2): 553-562.
2. Owens C W I, Belcher R V. A colorimetric micro-method for the determination of glutathione[J]. Biochemical Journal, 1965, 94(3): 705.

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