游离核酸大量提取试剂盒（磁珠法)

特别提示：包括游离核酸大量提取试剂盒（磁珠法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：游离核酸大量提取试剂盒（磁珠法)
英文名称：Magnetic Serum/Plasma DNA Maxi Extraction Kit
产品货号：WH0116
产品规格：2ml×50次|2ml×200次|2ml×1000次

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从2-5ml体积血清、血浆等样本中分离纯化高质量游离DNA。独特包埋的磁珠，在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程安全、便捷，提取的游离核酸得率高、纯度高，质量稳定可靠，尤其适合高通量工作站的自动化提取。

产品特点：
·本试剂盒即可满足手工提取也可适用于多种高通量平台批量提取。
·本试剂盒所得产物满足下游各类检测实验以及NGS分析。
·本产品适用于2-5ml体积的血清血浆样本。

试剂盒组成：

组分	2ml×50次	2ml×200次
裂解液GHH	2×80ml	4×160ml
缓冲液GDF	36ml	150ml
漂洗液PWG	20ml	2×40ml
Proteinase K	10ml	4×10ml
磁珠悬浮液E	2×750μl	6×1ml
洗脱缓冲液TBC	15ml	30ml

储存条件：室温（15-30℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，以溶解沉淀。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。）
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的核酸片段较小且提取量降低。
2．若裂解液GHH中有沉淀，可在室温中重新溶解，摇匀后使用。
3．本试剂盒组分以2 ml样本为基础，如果提取其它规格的样本，试剂不够时需另行购买。
4．第一次使用试剂盒时，请按照试剂瓶上的提示在缓冲液GDF和漂洗液PWG中添加无水乙醇。

Carrier RNA溶液的配制（选购，货号RT416-02）：
Carrier RNA是一种核酸捕获物，当样本中核酸含量较低时，使用Carrier RNA可以提高游离核酸提取效率。
向装有310μg Carrier RNA冻干粉的管子中加入310μl RNase-Free ddH2O，将Carrier RNA彻底溶解，得到终浓度为1μg/μl的溶液，并按实验情况分装到RNase-Free的离心管中，置于-20℃储存。使用时按照提取的次数取出相应的溶液，该溶液应避免反复冻融，冻融次数不能超过3次。

操作步骤：
使用前请先在缓冲液GDF和漂洗液PWG中加入无水乙醇，加入体积参照瓶上的标签。

1．根据样品体积按下表选择合适规格的离心管，依次加入血浆、裂解液、Proteinase K和1μl Carrier RNA（选购，目录号RT416-02）。

样品量	耗材规格	裂解液CFL	Proteinase K	磁珠WD
1ml	5ml离心管	1.5ml	100μl	25μl
2ml	5ml离心管	3ml	200μl	30μl
3ml	15ml离心管	4.5ml	300μl	45μl
4ml	15ml离心管	6ml	400μl	60μl
5ml	15ml离心管	7.5ml	500μl	75μl

  注意：本试剂盒以2 ml样本为基础，如果提取其它规格的样本，请按照表格中的用量进行增减。
2．涡旋振荡混匀后室温孵育20min，期间每3-5 min上下颠倒混匀10 sec，使磁珠和核酸充分结合。孵育结束后需简短离心以去除管盖内壁的液滴。
3．将离心管置于磁力架上2 min，待磁珠完全吸附时用移液器小心去除液体，取下离心管。
4．加入750 μl缓冲液GDF（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），上下颠倒混匀30 sec使磁珠充分悬浮，简短离心以去除管盖内壁的液滴。
  注意：可将步骤4中所有磁珠及液体转移至1.5ml规格磁力架进行后续操作。如果离心管壁上有残留磁珠，可以再加入200 μl缓冲液GDF漂洗，然后一并转移到1.5ml离心管中。
5．将离心管置于磁力架上1 min，待磁珠完全吸附时用移液器小心去除液体，取下离心管。
6．加入750 μl漂洗液PWG（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），上下颠倒混匀30 sec使磁珠充分悬浮，简短离心以去除管盖内壁的液滴。
7．将离心管置于磁力架上1 min，待磁珠完全吸附时用移液器小心去除液体，取下离心管。
8．重复步骤6和7一次。
9．将离心管置于磁力架上，室温晾干5-10 min。
  注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱核酸。
10．加入25-65 μl洗脱缓冲液TBC，用移液器吹吸使磁珠重新悬浮，56℃孵育5 min，期间每2min轻轻晃动使核酸充分洗脱。
11．将离心管放置于磁力架上静置2 min，待磁珠完全吸附时小心将核酸溶液转移至新的离心管中，并于适当条件保存。

除了游离核酸大量提取试剂盒（磁珠法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒
货号：BTN81107
规格：5次
本试剂盒是整合大提质粒DNA提取试剂盒和菌体内毒素清除剂两产品而成。菌体内毒素清除剂是我司独家推出的产品，在质粒提取前就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目前通用的先提取DNA+内毒素混合物，再从中纯化质粒DNA的弊端。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。

试剂盒特点：
1. 操作简单，只在经典的柱式质粒DNA提取前，增加菌体内毒素清除一步。
2. 去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
3.质粒丢失少，产率只比柱式质粒DNA提取试剂盒低5-10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
4. DNA可以直接用于转染等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
菌体内毒素清除剂	200ml
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	35ml
RNase A溶液(10mg/mL)	300μl
吸附柱活化液	12.5ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
DNA洗脱液3.0	10ml
说明书	1份

储存条件：RNase A溶液需4℃或-20℃保存，其余成分可室温保存，如有沉淀可加热溶解后再使用。

使用方法：
1. 用50mL塑料离心管收集不超过40mL的E.coli 饱和菌液，5000rpm离心5-10分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入10mL菌体内毒素清除剂，温和混匀后5000rpm离心5-10分钟，弃上清(含内毒素)。
3. 重复上述操作3次，得到的菌体将丢失了绝大部分细胞表面的内毒素。
4. 往细菌沉淀中加入5mL溶液A(第一次使用时需要将RNase A溶液全部加入并混合均匀，未用完的部分放4℃保存)，充分振荡悬浮。注意：充分重悬细胞沉淀(无块状物)对于获得高的质粒产量十分重要。
5. 加5mL溶液B，温和翻转10 余次至透明。若混合液不透明，应减少细菌的用量或室温放臵5-10分钟直到裂解液变透明。注意: 避免剧烈振荡，否则细菌基因组DNA 将断裂为小片段，与质粒难以分离，污染质粒DNA。
6. 加入冰浴的7mL溶液C，颠倒混匀，冰上放臵10分钟。混合物中将有白色絮状物形成。注意不要过分振荡。
7.在等待期间，活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入2.5mL活化液，套上收集管后室温放臵2分钟，然后5000rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须立即使用。如果不活化，质粒得率将低20-40%左右。
8. 6000rpm离心10分钟。如果离心管承受能力强，离心速度还可以适当提高以充分沉淀絮状物。
9. 将上步得到的上清液移入到大提离心吸附柱中，放入50mL收集管中。室温放臵5分钟左右以便让质粒DNA跟膜结合。
10. 6000rpm离心5分钟，质粒DNA 将与大提离心吸附柱中的膜结合。弃穿透液。
11. 将10mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静臵2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。
12. 重复上步一次。
13.室温6000rpm 空甩5分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过，否则残留乙醇会影响后续实验。
14. 将大提离心吸附柱放入一个干净的50mL塑料离心管中，加0.5mL DNA洗脱液3.0(洗脱液如加热到50-65℃效果更佳)，室温静臵2分钟后6000rpm离心5分钟，收集液即是质粒DNA溶液。
15. 重复上步3-4次可洗脱更多的质粒DNA。DNA 洗脱液3.0 不够可以用TE或超纯水替代。
16. 合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。

注意事项：
1．细菌培养时间一般为12-16小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。
2．注意溶液A：溶液B：溶液C的比例为5：5：7。若细菌量增大，需按比例放大这些溶液的使用量。
3．随菌体增多应延长溶液B的作用时间，直至溶液成粘稠透明状。但时间过长会导致质粒DNA变性。
4．加溶液C后形成的白色沉淀中有变性的蛋白质、细菌基因组DNA和细胞碎片，离心后应避免带入到后续处理中。
5．通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
6．质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般1.5mL 过夜培养菌体可收获约10μg高拷贝质粒。
7．纯化的质粒在电泳中表现为2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常，未分开的环套质粒，易被误判为基因组DNA。