植物线粒体提取试剂盒

本试剂盒可用于从植物叶片组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于田间采摘或者实验室培养的植物叶片中线粒体的制备。其制备物，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。

试剂盒组成：

组份	50T	100T
Lysis Buffer	100mL	200mL
β-巯基乙醇	1mL	1mL
Mito-Wash Buffer	25mL	50mL
Store Buffer	5mL	10mL

保存条件：4℃可保存3个月，长期保存可置-20℃。

操作步骤：
1．样本采集前处理：无论田间自然生长还是实验室组织培养，采摘前须避光生长24-48小时，以减少叶片组织中糖类及叶绿体含量。取适量Lysis Buffer，加入0.5% β-巯基乙醇，10ml Lysis Buffer加入50μlβ-巯基乙醇，混匀，形成Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，此溶液可2～8度保存一个月。
2．叶片用蒸馏水清洗2-3次，滤纸吸干，有条件请用液氮研磨叶片1-2克，研磨完后，取800mg左右研磨的叶片粉，加入1.5ml预冷的Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，混匀。如果无条件（无液氮），请预冷研钵，取洗过的叶片1000mg，用剪刀剪为碎块放入玻璃匀浆器或者研钵中。加入1.5ml预冷的Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，冰上研磨至看不见明显组织块；
3．将研磨物放置合适的离心管，4℃，1000×g离心5min；
4．将上清转移到一新的离心管中，在沉淀中加入0.5ml Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，混匀，再次4℃，1000×g离心5min，取上清；合并两次上清，将上清4℃ 1000×g再次离心5min。
5．取上清，加入一新的离心管中，4℃，16,000×g离心10min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。
6．在线粒体沉淀中加入0.5mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000×g离心5min；
7．取上清，加入一新的离心管中，4℃，16,000×g离心10min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；
8．用50 -100μL Store Buffer或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事项：
1．以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。
2．进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接在第7步的沉淀中加入上样缓冲液裂解线粒体。
3．β-巯基乙醇有毒，请注意通风及防护。

一般低温度心机都有离心力显示，如果没有，可以用以下公式简单的换算。
  G＝1.11×(10^-5)×R×[rpm]²
G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示；[rpm]²即：转速的平方；R为半径，单位为厘米。