高效热启动DNA聚合酶

特别提示：包括高效热启动DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高效热启动DNA聚合酶
英文名称：SuperStar DNA Polymerase
产品货号：WE0123
产品规格：500U|2500U

  本产品是一种采用zuì新封闭技术的Taq DNA Polymerase，适用于HotStart PCR。在70℃以下，酶的活性中心被完全封闭，有效抑制了聚合酶活性，并能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。在95℃条件下孵育5分钟后，酶的部分活性得以释放。随着热循环的不断进行，剩余的酶活会源源不断地释放出来，这就使得此酶克服了常规Taq酶容易出现平台期的弊端，其扩增效率大大提高。
  本品进行PCR扩增时，PCR产物3"末端附有一个“A”碱基，可直接用于T/A克隆。本产品具有扩增速度快、特异性好、稳定性好的特点，主要应用于对扩增产物要求量大的PCR和RT-PCR反应。

产品组成：

组份	500U	2500U
SuperStar DNA Polymerase，5 U/μl	100μl	5×100μl
10×PCR Buffer	1.8ml	5×1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM镁离子。

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50 μ l
SuperStar DNA Polymerase，5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意： 可以在室温下配制反应液，zuì好将试剂置于冰上。引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min
变性	94℃	0.5-1 min	25-35个循环
退火	50-68℃	0.5-1 min
延伸	72℃	1 min
终延伸	72℃	10 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的SuperStar DNA Polymerase的延伸速率为1 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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