ARE荧光素酶报告基因质粒(抗氧化响应元件)

特别提示：包括ARE荧光素酶报告基因质粒(抗氧化响应元件)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：ARE荧光素酶报告基因质粒(抗氧化响应元件)
英文名称：ARE-luc Reporter gene plasmid
产品货号：YT447
产品规格：1μg

ARE荧光素酶报告基因质粒是用于检测基于顺式作用元件antioxidant responseelement(ARE，抗氧化响应元件)的转录活性水平的报告基因质粒。pARE-luc是以pGL6质粒为模板，在其多克隆位点插入了2个ARE结合位点，可以高灵敏度地检测顺式作用元件ARE的激活水平，可以用于检测细胞的抗氧化水平或氧化应激状态。

pGL6质粒模板是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。

ARE质粒的主要信息如下：
 

Base pairs	5622
ARE response element(ARE RE)	32-77
luc2 reporter gene	123-1775
SV40 late poly(A)signal	1810-2031
SV40 early enhancer/promoter	2079-2497
Synthetic neomycin phosphotransferase
(Neor)coding region	2522-3316
Synthetic poly(A)signal	3341-3389
Reporter Vector primer 4(RVprimer4)binding region	3456-3475
ColE1-derived plasmid replication origin	3713
Synthetic Beta-lactamase(Ampr)coding region	4504-5364
Synthetic poly(A)signal/transcriptional pause site	5469-5622
Reporter Vector primer 3(RVprimer3)binding region	5571-5590

ARE质粒的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. pARE-luc可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒（YT273）。

储存条件：-20℃。

除了ARE荧光素酶报告基因质粒(抗氧化响应元件),，我公司还供应以下相关产品：



名称：DNA粘转平试剂盒
货号：BTN60107
规格：20次
本产品利用Pfu DNA polymerase所具有3′到5′的聚合酶活性和5′到3′外切酶活性，将3′或5′突出的DNA片段转化成平末端，用于克隆工作。

产品特点：
1. 简单，精心优化过的2×Polishing Buffer中含有所需要的所有成分，不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA载体。

产品组成：

成分	规格
Pfu DNA Polymerase(3U/μL)	20μl
2×Polishing Buffer	0.5ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

使用方法：

1. DNA片段的准备：
无论是来源Taq，Tth,T7，Klenow和Vent等DNA聚合酶合成的DNA片段，还是用限制性内切酶制备的DNA片段，粘转平之前均需要将DNA沉淀以便去除反应液中的无关成份。沉淀DNA的方法包括经典的盐/纯沉淀法，离心柱DNA 吸附法和百奥莱博的一管式非醇超快DNA沉淀法。
2. 设置粘转平(Polishing)反应：

在一个干净的离心管中，分别加入
3′或5′突出的DNA片段	10-500ng
2×Polishing Buffer	25μL
Pfu DNA polymerase	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时。

注意：如果不使用热盖式PCR 仪器加热，则需要在反应管中再加入适量液体石蜡以防反应过程中水份蒸发。
3.反应后处理
粘转平反应后，样品可以放-20℃长期保存，也可以直接用于T4 DNA连接酶催化的连接反应。对10μL的连接反应体系，一般需要加入1-2μL粘转平反应液。由于Pfu DNA polymerase在连接反应的温度条件下几乎没有活性，所以不必去除。但文献报道，去除后连接效率更高。