无内毒素质粒少量提试剂盒

特别提示：包括无内毒素质粒少量提试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：无内毒素质粒少量提试剂盒
英文名称：Endotoxin-free Plasmid mini Extraction Kit
产品货号：WH0033
产品规格：50次

本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术，高效专一地结合质粒DNA。同时采用特殊的去内毒素系统，可有效的去除内毒素、蛋白等杂质；整个提取过程仅需1h，方便快捷。质粒提取得率与质粒拷贝数、宿主菌的种类和培养条件等因素有关，每次处理5-15ml过夜培养的细菌培养液，提取多至70μg的质粒DNA。

产品特点：
·快速高产：1h左右提取5-70μg质粒。
·质粒纯度高：特殊的去内毒素体系配合CP4吸附柱特异吸附核酸，内毒素含量低。
·应用广泛：适用于酶切、PCR、测序、连接、转化等常规实验及基因治疗、细胞显微注射、基因沉默、转染等高端实验。

提取实例：

使用本试剂盒提取不同体积的质粒，洗脱体积200μl，低拷贝（pBR322)上样3μl；高拷贝（pBS)上样2μl，1%琼脂糖凝胶，6V/cm，电泳30min。


使用本试剂盒提取pEGFP质粒转染293T细胞，转染48小时后观察细胞状态检测GFP荧光。

质粒得率：

质粒类型	处理量	得率	质粒
高拷贝质粒	5～15ml	15μg～70μg	pTZ,pUC,pBS,pTG-T
低拷贝质粒	5～15ml	5μg～25μg	pBR322,pACYC及其衍生载体,pSC101 及其衍生载体,SuperCos,pWE15

试剂盒组成：

组分	50T
平衡液BL	30ml
溶液P1	30ml
溶液P2	30ml
溶液P4	30ml
去蛋白液PD	30ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液TB	15ml
RNaseA（10mg/ml)	300μl
过滤柱CS	50个
吸附柱CP4	50个
收集管（2ml)	100个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。（注意：当低温贮存时，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以平衡溶液温度）。单独包装的RNaseA在室温可稳定保存12个月以上。加入RNaseA后的溶液P1应置于2-8℃保存，可稳定保存6个月。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．溶液P1在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
2．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液PW中加入无水乙醇。
3．使用前先检查平衡液BL、溶液P2和P4是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
4．注意不要直接接触溶液P2和P4，使用后应立即盖紧盖子。
5．所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心，速度为12000rpm （~13400×g )。
6．提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、P4的用量，洗脱缓冲液应在65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间，以增加提取效率。
7．实验前使用平衡液处理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基质膜，提高得率。
8．用平衡液处理过的柱子zuì好当天使用，放置时间过长会影响效果。

使用方法：

1．柱平衡步骤：向吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12,000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2．取5-15ml过夜培养的菌液加入离心管中，12000rpm （~13400×g )离心1 min，尽量吸除上清。
  注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中,菌体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。
3．向留有菌体沉淀的离心管中加入500μl溶液P1 （请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
  注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
4．向离心管中加入500μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
  注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5．向离心管中加入500μl溶液P4，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀，然后室温放置10min左右，12000rpm （~13400×g )离心10min，此时在离心管底部形成沉淀。
  注意：P4加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6．将上一步收集的上清液分次加入过滤柱CS（过滤柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g )离心2 min，滤液收集在干净的2 ml离心管中（自备）。
7．向滤液中加入0.3倍滤液体积的异bǐng醇（加入异bǐng醇过多容易导致RNA污染），上下颠倒混匀后转移到吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）。
  注意：过滤后滤液会损失，根据损失的不同请加入不同体积的异bǐng醇。吸附柱CP4的zuì大容积为700 μl，所以需要分次过柱。
8．室温12000rpm （~13400×g)离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  注意：将第7步中所得溶液分次过柱，每次均按以上条件操作。
9．向吸附柱CP4中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
10．向吸附柱CP4中加入600 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
  注意：加入漂洗液PW后，如果室温静置2-5 min，有助于更好地去除杂质。
11．向吸附柱CP4中加入600 μl漂洗液PW，12000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液。
12．将吸附柱CP4重新放回收集管中，12000rpm （~13400×g )离心2 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP4开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
13．将吸附柱CP4置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2 min，12000rpm （~13400×g )离心1 min将质粒溶液收集到离心管中。
  注意：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，重复步骤13。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。洗脱缓冲液体积不应少于100 μl，体积过小影响回收效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

质粒DNA浓度及纯度检测：
1．得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。电泳可能为单一条带，也可能为2到3条DNA条带，这主要与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。OD₂₆₀值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA。
2．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值。

除了无内毒素质粒少量提试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：
 

货号	名称	规格
BTN3660	非冻型组织DNA保存液	250mL
BTN71204	柱式凝固血液DNA提取试剂盒	50次
BTN101112	柱式水样DNA提取试剂盒	50次
BTN60205	柱式质粒DNA提取试剂盒	50次
YT013	基因组DNA小量提取试剂盒(适用于动物组织/细菌/昆虫)	50次
WE0170	DNA产物快速纯化试剂盒	50次|200次
WE0178	细菌基因组DNA提取试剂盒	50次
WE0209	磁珠法口腔拭子DNA提取试剂盒	96次
ALH152	酵母基因组DNA快速提取试剂盒(柱式吸附)	50次
ALH075	柱式质粒小量提取试剂盒	100次|200次
QN0891	酵母基因组DNA提取试剂盒	50T|100T
QN0892	全血基因组DNA提取系统(沉淀法)	50T|200T
QN0901	革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒	10T
CZ003	磁珠法游离DNA提取试剂盒	20次/100次/10次(L)/50次(L)
CZ004	磁珠法粪便DNA提取试剂盒	20次/100次
BTN3671	血液DNA提取试剂盒	50次
BTN100307C	酸洗玻璃珠(400μm)	10g
MT0046	组织细胞基因组DNA提取试剂盒	50T
MT0048	质粒小量提取试剂盒	100T
QN2066	酵母质粒小量提取试剂盒	50T|100T
WH0002	抗凝血液基因组DNA提取试剂盒（0.1-20ml全血)	50mL血|200mL血
WH0011	中量血液基因组DNA提取试剂盒（0.5-3ml)	10次
WH0004	干血斑基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)	50次|200次
WH0020	酵母基因组DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)	50次
WH0031	高纯质粒大量提取试剂盒	10次
WH0037	高纯度质粒微量提取试剂盒	50次
WH0038	微量质粒提取试剂盒	50次|200次
WH0151	高通量96孔板质粒提取试剂盒（磁珠法)	2×96孔