植物种子蛋白提取试剂盒(2D电泳用)(高淀粉含量样本用)

特别提示：包括植物种子蛋白提取试剂盒(2D电泳用)(高淀粉含量样本用)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：植物种子蛋白提取试剂盒(2D电泳用)(高淀粉含量样本用)
英文名称：Plant seed protein extraction kit (2D electrophoresis) (high starch content sample)
产品货号：HR8041
产品规格：50T/100T

植物种子蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种高淀粉含量的植物种子样品中提取可溶性蛋白。如水稻、荞麦、玉米、小麦等。提取过程简单方便。
本试剂盒提取的蛋白样本不含有高浓度的盐成分，可直接用于等电聚焦、双向电泳，如下游实验需要直接用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验，请使用我公司其他货号的试剂盒。

储存条件：提取液A 2-8℃保存；提取液BCDE室温保存。
效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得zuì佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS缓冲液● 移液器、吸头 ● 2ml、5ml离心管 ●离心机及离心管 ● 涡旋振荡器
● 振荡器/脱色摇床 ●冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

1．将适量待提取种子样本剥皮，用PBS或纯水洗涤3次。
2．将样本置研钵液氮充分研磨。
【注】：
● 没有液氮研磨条件也可直接用提取液A 研磨。
3．加入500μl蛋白提取液A充分混匀。移入离心管。
4．将离心管置振荡器轻轻振荡30分钟-60分钟。
5.在4℃，15000g离心20分钟。
6．收集上清，弃沉淀。
7．取5ml离心管，加入500μl离心上清，再加入2ml试剂B，500μl试剂C，1.5ml试剂D，涡旋20秒充分混匀。
8.冰浴或4℃冰箱静置30分钟以上。
9.在4℃，11000g条件下离心15分钟。
10.小心移除上层清液丢弃，收集中下层含蛋白层。
11.在4℃，15000g以上条件下离心20分钟。
12．弃上清，收集沉淀。
13．用50－200μl试剂E充分溶解蛋白沉淀。
【注】：
● 也可直接用等电聚焦用水化上样缓冲液过夜溶解蛋白沉淀。
14.在4℃，12000g条件下离心20分钟。
15．收集上清用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
部分植物种子蛋白丰度极低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大种子样本的上样量。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。zuì好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂E中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。

除了植物种子蛋白提取试剂盒(2D电泳用)(高淀粉含量样本用),，我公司还供应以下相关产品：



名称：考马斯亮蓝R-250染色液
货号：BTN140209
规格：250mL
考马斯亮蓝R250是zuì经典的SDS-PAGE染色方法，本产品就是基于此方法而开发的产品。

产品特点：
1．即开即用，不需要自己单独准备所有溶液。
2．不需昂贵仪器，肉眼即可观察结果，不象其他纳克级的染色方法需要贵重的仪器设备(如SYPRO系列的高灵敏度的荧光染料需要荧光成像系统)。
3．与普通扫描仪等兼容，便于保存数据和后续处理。
4．考马斯亮蓝R250 尤其适用于SDS-PAGE电泳微量蛋白质的染色。

产品组成：

成分	规格
染色液	250ml
脱色液	250ml×3
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
1．按常规方法进行蛋白电泳。
2．凝胶电泳停止后，切除浓缩胶，转移分离胶至染色容器中。
3．倒入30-40mL染色液，摇床上缓慢震荡3-4小时。
4．弃掉染色液，加入30-40mL 脱色液脱色。
5．重复脱色2-3次，直至背景透明，条带更清楚。

名称：细胞核蛋白提取试剂盒
货号：SNM415
规格：50T

名称：低分子量蛋白Marker II(14.4～116KD)
货号：RFT048
规格：20T(100μl)
本产品包含7种已知分子量的标准蛋白质组成，分子量范围为14.4kD-116kD，可以用来判断 SDS-PAGE未知蛋白的分子量。本成品由于含有SDS，不适于非变性胶蛋白电泳(Native PAGE)。



使用说明：
1、第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用。
2、-20℃取一管样品，彻底融化，95℃处理5分钟后立即上样。
注：
a.一次热处理后，未用尽样品-20℃保存；下次使用时只要室温完全融化混匀后即可上样，可以不用再加热处理。然而，如出现带型缺失现象或样品聚集在分离胶上沿，可在Marker中加入终浓度为50mM的DTT，95℃处理5分钟后再上样。
b.上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5μl，其他规格梳子请适当调整上样量。
3、电泳结束后，染色，观察结果。
注：使用银染时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，可以适当降低Marker上样量。

储存条件：-20℃。

名称：红色荧光标记人源高密度脂蛋白
货号：SY0444
规格：500μg
我司提供的Human DiI-HDL为无菌包装，可以直接稀释使用。除提供DiI-HDL，我们还提供不带标记的HDL，I125标记的HDL。

脂蛋白在人体中主要起到运输脂质（如胆固醇、脂质、甘油三酯）的作用，按照分子量大小，主要分为以下几种（从高到低）：乳糜（CM）、极低密度脂蛋白 (VLDL)、中间密度脂蛋白 (IDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、高密度脂蛋白（HDL）等。其中HDL是密度zuì高的脂蛋白，不像其他大分子脂蛋白，主要将脂质运输到细胞，HDL是将脂质运出细胞，因此，高密度脂蛋白具有清除血管内多余血脂、清除血垢、清洁血管、维持细胞内胆固醇量的相对衡定的作用，从而限制动脉粥样硬化的发生发展，起到抗动脉粥样硬化作用。

本品Human DiI-High Density Lipoprotein为荧光探针DiI（1,1-dioctadecyl-3,3,3,3- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）标记的高密度脂蛋白，可以用来观察培养细胞的HDL结合位点，或筛选HDL受体表达缺陷型细胞突变株。也可以通过流式细胞术评估细胞受体水平，或检测组织内的受体水平。

制备方法
纯化的人健康血浆来源的HDL直接标记上DiI荧光探针，然后通过超速离心以及透析的方法纯化回收标记产物，并滤膜过滤除菌。纯化的DiI-HDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS，pH 7.4中。

浓度：0.8-3.0 mg/ml
外观：乳状液体
吸光度比例（Absorbance Ratio）：DiI/Protein=555nm/275nm=1.4
缓冲液组分（Buffer Components）：0.02 mM EDTA in PBS, pH 7.4
储存条件：4℃，无菌避光，有效期6周

名称：总蛋白提取试剂盒
货号：HR0001
规格：50T/100T
总蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取总蛋白。配合其他组份时，也可以用于植物本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究实验。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，需要除盐后再用于2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒(相关产品HR0165)。

储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；磷酸酶抑制剂、蛋白提取液2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 使用前请仔细阅读产品说明书。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品特点：
1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2．提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5．总蛋白提取液：含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 吸头、离心管 ● 移液器 ●冰盒 ●离心机 ● 涡旋振荡器 ●冰箱

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
● 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
● 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
●蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA 结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
● Western 实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubμlin。
● 更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系本公司索取。
细胞总蛋白提取：
悬浮细胞蛋白提取：
1．提取液制备：
每500μl冷的总蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物和2μl 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】
① 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
② 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取5×106个细胞，在4℃，2500g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
【注】
①细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
3．用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．每5×106 -1×107个细胞(大约50mg细胞，50μl细胞压积)中加入500μl冷的总蛋白提取液，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，无明显细胞沉淀。
5.在4℃，14000g条件下离心15分钟。
6．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
7．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】
③ 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
④蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
贴壁细胞蛋白提取：
1．提取液制备：
每500μl冷的总蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物和2μl 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】
① 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
② 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．小心吸取贴壁细胞的培养液。
3．用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干PBS。
4．加入适量冷的总蛋白提取液，振荡15-30分钟，至细胞充分裂解，用细胞刮刀刮一遍，将裂解液吸入另一干净离心管。
【注】
① 推荐裂解液使用量：100mm培养皿500μl；60mm培养皿250μl；6孔板200μl/孔；24孔板100μl/孔；96孔板50μl/孔；75cm2培养瓶500μl。
② 也可用细胞刮刀刮下细胞或者用胰酶将细胞消化下来后按悬浮细胞操作步骤进行。
5．在4℃，14000g条件下离心15分钟。
6．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到总蛋白。
7．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】
① 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
②蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
组织总蛋白提取：
1．提取液制备：
每500μl冷的总蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物和2μl 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】
① 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
② 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取50-100mg组织样本用剪刀剪碎，加入总蛋白提取液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。
【注】
① 如果组织样品很细小，可以剪碎后直接加入提取液振荡15分钟，可以不用匀浆器。
② 也可用液氮研磨的方法，具体方法可以联系本公司hhsky1017@163.com 索取详细资料。
3．将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡10-20分钟。
4.在4℃，10000-14000g条件下离心15分钟。
5．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到总蛋白。
6．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】
① 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
②蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。zuì好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA 结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。