新型植物基因DNA组提取试剂盒（离心吸附柱法)

特别提示：包括新型植物基因DNA组提取试剂盒（离心吸附柱法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：新型植物基因DNA组提取试剂盒（离心吸附柱法)
英文名称：Plant genomic DNA rapid extraction kit
产品货号：WH0025
产品规格：50次|200次

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取多种植物组织中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA，可zuì大限度去除杂质蛋白。提取的基因组DNA片段大，可达40 kb，纯度高，质量稳定可靠。

产品特点：
·简单快速：1h内即可获得超纯的基因组DNA。
·无毒害：无需使用酚/氯fǎng抽提，操作安全。
·纯度高、质量好：100mg植物组织中可提取到3-30μg基因组DNA，OD₂₆₀/OD₂₈₀的值在1.7-1.9范围内。

下游应用：
· PCR、qPCR与多重PCR。
· RAPD、RFLP、AFLP、SSR等分子标记。
·文库构建、Southern杂交。

不同植物组织DNA提取得率：（样本量：100mg，OD₂₆₀/OD₂₈₀：1.7～1.9）

植物材料	平均DNA产量
拟南芥	3～4μg
小麦	25～30μg
松树	25～30μg
马铃薯	4～6μg
番茄	10～15μg
油菜	2～4μg
烟草	20～25μg
水稻	10～25μg
大豆	20～30μg
玉米	20～30μg

不同来源的植物材料中基因组会有差异，以上所有材料均为新鲜幼嫩叶片。

提取实例：

本试剂盒提取的各种植物基因组DNA电泳结果。
起始量：100mg叶片，100μl洗脱，3μl上样，琼脂糖凝胶浓度为1%，6V/cm，电泳20min，marker为λDNA/Hind III
1：大豆新鲜幼嫩叶片；
2：烟草新鲜幼嫩叶片；
3：小麦新鲜幼嫩叶片；
4：玉米新鲜幼嫩叶片；

试剂盒组成：

组分	50T	200T
缓冲液LP1	25ml	100ml
缓冲液LP2	10ml	40ml
缓冲液LP3	21ml	84ml
漂洗液PW	15ml	50ml
洗脱缓冲液TE	15ml	60ml
RNase A（10mg/ml)	300μl	1.25ml
吸附柱CB3	50个	200个
收集管（2ml)	50个	200个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2．缓冲液LP1可能发黄，并不影响提取效果。
3．若缓冲液LP1或LP2有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，摇匀后使用。
4．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。

使用方法：
使用前请先在缓冲液LP3和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．处理材料：
  取植物新鲜组织100mg或干重组织20 mg，加入液氮充分碾磨。加入400μl缓冲液LP1和6 μl RNase A（10 mg/ml)，旋涡振荡1 min，室温放置10min。
2.加入130 μl缓冲液LP2，充分混匀，旋涡振荡1 min。
3.12000rpm（~13400×g )离心5 min，将上清移至新的离心管中。
4.加入1.5倍体积的缓冲液LP3（例如500 μl的上清液加750 μl缓冲液LP3）（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），立即充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀。
5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，吸附柱CB3放入收集管中。
6.向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
  注意：如果吸附柱膜呈现绿色，向吸附柱CB3中加入500 μl无水乙醇，12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7.重复操作步骤6.
8.将吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
9.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min，将溶液收集到离心管中。
  注意：为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12000rpm （~13400×g )离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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