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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
232
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
阴凉干燥
- 规格:
48次/盒
特别提示:包括马源性成分单重荧光PCR检测试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:马源性成分单重荧光PCR检测试剂盒
产品货号:SYA295
产品规格:48次/盒
除了马源性成分单重荧光PCR检测试剂盒,,我公司还供应以下相关产品:
名称:牛源性成分单重荧光PCR检测试剂盒
货号:SYA290
规格:48次/盒
一、简介
本试剂盒用一对牛源性成分特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用荧光PCR技术对牛源性成分DNA进行体外扩增检测。本试剂盒中牛源性成分的探针报告基团为FAM。
二、用途
该试剂盒适合于各种饲料及其它样品中牛源性成分的检测。
三、试剂盒组成(48T)
组成成分 数量 规格
牛物种荧光qPCR反应液(Bos-qPCR MIX) 1管 600μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(Bos-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列,Bio-Rad系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品采集与DNA提取
6.1 样品采集
样品的采集按照国家标准《饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应(PCR)法》(GB/T 20190-2006)要求进行。
6.2 DNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Bos-qPCR MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 15µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Bos-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃ 延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX 参比荧光。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(Bos-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明牛源性成分核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明牛源性成分核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行牛源性成分qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明牛源性成分核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验。生长势较弱,叶色深绿、叶面有皱。果实圆筒、倒卵圆或椭圆形等,果同光滑、皮薄,肉厚1-2cm,脆嫩多汗式或面而少汁可溶性固形物含量8-12%。皮瓤均可食用。单要重多在0.5kg以下,不耐贮运。种子中等或小。较耐高湿。在日照较少,温差较小的环境也能正常生长。中国广泛栽培,东北、华北是主产区。日本、朝鲜、印度及东南亚等国也有栽培。 生长发育与果实形成:甜瓜的生长发育过程可分为发芽期、幼苗期、伸蔓期和结果期。 发芽期:播种至子叶展平第一真叶显露,约需10天,这一时期生长量小。发芽
。2、中药活性成分的提取。植物药有效成分往往被包在细胞壁以内,用纤维素酶可以破坏细胞壁的纤维素,提高有效成分的提取率。3、纤维素酶的作用机制。根据酶的作用方式纤维素酶分为C1酶、CX酶和纤维二糖酶等类型。C1酶主要作用于天然纤维素,使之转变为非结晶的纤维素。CX酶又分为CX1酶和CX2酶两种。CX1酶是一种内断型纤维素酶,它从水合非结晶纤维素分子内部作用于β-(1,4)糖苷键,生成纤维糊精与纤维二糖。CX2酶是一种外断型纤维素酶,它从水合性纤维素分子的非还原端作用于β-(1,4)糖背键,逐步切断β
以做为复制的模板. 而Annealing 则是令 Primers于一定的温度下附着于模板DNA两端。 最后在DNA聚合酶 (e.g. Taq-polymerase) 的作用下进行引物的延长 (Extension of primers)及另一股的合成。PCR的历史 PCR的发展可以说是从DNA合成酵素的发现缘起。DNA合成酵素最早于1955年发现 (DNA polymeraseI), 而较具有实验价值及可得性的Klenow fragment of E. Coli 则是于70年代的初期由Dr. H
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