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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
201
- 英文名:
T7 RNA Polymerase
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
阴凉干燥
- 规格:
5000U
特别提示:包括T7 RNA聚合酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:T7 RNA聚合酶
英文名称:T7 RNA Polymerase
产品货号:JN0010
产品规格:5000U
本酶是噬菌体T7 DNA 编码的酶,以含有T7 启动子序列的双链DNA 为模板,以NTP 为底物,合成与启动子下游的单链DNA 互补的RNA。本酶对T7 启动子序列具有高度特异性,不能识别其它生物来源的启动子。
产品组成:
| 组份 | JN0010-5000U |
| T7 RNA Polymerase(20U/μl) | 250μl |
| 5×Transcription Buffer | 1ml×2 |
活性定义:在37℃、pH8.0 的条件下,1小时内使1nmol的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
产品用途:
1、合成单链RNA;
2、合成高特异性RNA探针;
3、合成siRNA前体;
4、制作RNA剪接反应(RNA splicing)的前体;
5、以帽类似物(Cap analog)为引物,制作Capped mRNA。
使用建议:
1、为了特定区域的有效转录,建议在其区域下游把模板DNA 预先切成平端或5′突出末端。
2、缓冲液中的亚精胺与核酸结合可能形成不溶物,建议zuì后加入模板DNA。
常用反应体系(50μl):
| 组分 | 体积 |
| 5X Transcription buffer | 10μl |
| ATP/GTP/CTP/UTP Mix, | 10μl |
| 10 mM each | (终浓度为2 mM ) |
| 线性化的模板DNA | 1μg |
| RNase Inhibitor(40U/μl) | 1.25μl |
| T7 RNA Polymerase(20U/μl) | 1.5μl |
| DEPC 水 | 补足到50μl |
| 37℃反应2 小时。 | |
质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DN A残留,无RNA聚合酶,无DNase和RNase污染。
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文献和实验一般是指 DNA依存性 RNA聚合酶。是催化以 DNA为模板( template)、三磷酸核糖核苷为底物、通过磷酸二酯键而聚合的合成 RNA的酶。因为在细胞内与基因 DNA的遗传信息转录为 RNA有关,所以也称转录酶。反应以下式示: n1 -n4 表示各个模板的 DNA链的胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘧啶、腺嘌呤的碱基数。通过特异的碱基配对的形成,合成具有与模板 DNA链完全互补的碱基排列的 RNA。反应是由( 1) DNA与酶的结合
,则可计算其直径约为100A,即约为双链DNA的30bp节段的长度。然而全酶可结合约60个核苷酸 ,提示其形状应为椭圆球形。 结构 为什么细菌 的RNA聚合酶需要这么大和复杂的分子结构呢?而某些噬菌体特有的RNA聚合酶则要小得多,仅由一条多肽链组成。这证明RNA合成所需的机构可以远比宿主的酶小。这种情况说明,噬菌体内的转录仅需一条"最小"的机构。然而这种酶只能识别噬菌体本身所有的少数几个启动子;它们不能识别其他启动子。例如噬菌体T3和T7的RNA聚合酶分子很相似
合成是以DNA的一条链为模板而进行的,所以这种转录方式又叫做不对称转录。②都以四种三磷酸核苷的底物,原料;③都遵循DNA与RNA之间的碱基配对原由,A=U,T=A,C=G,合成与模板DNA序列互补的RNA链。④RNA链的延长方向是5’→3’的连续合成。⑤需要Mg2+或Mn2+离子。⑥并不需要引物。RNA聚合酶缺乏3’→5’外切酶活性,所以没有校正功能。 RNA聚合酶催化下列反应: 大肠杆菌RNA聚合酶的研究得比较透彻的,这是一个分子量达50多万,全酶由五咱亚基组成,去掉δ
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