- ￥2422
- 罗氏
- 11685597910
- 生物素RNA标记混合物
- 2025年08月02日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
roche biotin RNA labeline mix
- 英文名：
roche biotin RNA labeline mix
- CAS号：
11685597910
- 保质期：
生物素RNA标记混合物
- 供应商：
Roche
- 保存条件：
生物素RNA标记混合物
- 规格：
40 μL
生物素RNA标记混合物
| orm | solution |
| usage | sufficient for 20 reactions (transcription) |
| packaging | pkg of 40 μL |
| mfr. no. | Roche |
10x concentrated solution with: 10mM each ATP, CTP, GTP, 6.5mM UTP, 3.5mM Biotin-16-UTP, pH 7.5
Principle
Biotin-labeled, single-stranded RNA probes of defined length are generated by in vitro transcription. Biotin-16-UTP is incorporated by SP6, T7, and T3 RNA polymerases at approximately every 20 to 25th nucleotide of the transcript under the conditions described below. The Biotin RNA Labeling Mix is specifically designed for the use with Roche SP6,T7, and T3 RNA Polymerases, which are supplied with an optimized transcription buffer.
Preparation Note
Assay Time: 135 minutes
Sample Materials
• Linearized plasmid DNA
The DNA to be transcribed is cloned into the polylinker site of an appropriate transcription vector which contains adjacent to the polylinker a promoter for SP6, T7 or T3 RNA polymerase. For the synthesis of ′run off′ transcripts the plasmid is linearized by a restriction enzyme. Restriction enzymes creating 5′-overhangs should be used; 3′ overhangs should be avoided. The linearized template DNA should be purified by phenolchloroform extraction and ethanol precipitation, to avoid RNase contamination. For ′run around′ transcription circular plasmid DNA is used.
• PCR product
PCR-fragments which contain RNA polymerase promoter sequences can also act as templates for transcription. Purification of the correct PCR fragment by gel electrophoresis prior to transcription is recommended.
Labeling Efficiency
A standard labeling reaction with 1μg linear template DNA and an RNA polymerase produces approx. 10μg of full-length, biotin-labeled RNA. In a spot test, a combination of anti-biotin-AP and the chemiluminescence substrate CSPD can detect as little as 0.3pg of the biotin-labeled RNA.
Quality
Function tested in combination with the DIG RNA Labeling Kit.
Specificity
Heat inactivation: Stop the reaction by adding 2 μl 0.2 M EDTA (pH 8.0).
一般描述
特异性
应用
生物素标记RNA还应用于一系列杂交技术：
- DNA印迹
- RNA印迹[3]
- 斑点印迹
- 菌落及菌斑清除
- RNA酶保护试验
- 原位杂交[4]
- 微阵列杂交
- RNA pull down试验[1]
特点和优势
10x 浓缩液包含: ATP、CTP、GTP各10mM，6.5mM UTP，3.5mM生物素-16-UTP，pH 7.5
质量
原理
制备说明
样品材料
- 线性化质粒DNA：待转录的DNA将会被克隆至含有SP6，T7或T3 RNA聚合酶启动子并相邻于多接头的合适转录载体的多接头位点。对于′流失′转录本的合成，质粒是通过限制性酶进行线性化的。应使用限制性酶生成的5′-突出；应避免3′突出。线性化模板DNA应采用酚氯仿萃取和乙醇沉淀法纯化，以避免RNase污染。为′完成′转录，使用了环状质粒DNA
- PCR产物：含有RNA聚合酶启动子序列的PCR片段，也可以作为转录模板。推荐在转录前通过凝胶电泳纯化正确的PCR片段。
- 标记效率：μ通过1μg线性模板DNA和RNA聚合酶进行标准标记反应，产生大约10μg全长生物素标记RNA。在斑点试验中，联用抗生物素-AP与化学发光底物CSPD可检测低至0.3pg的生物素标记RNA。
其他说明
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文献和实验, or Fluorochromes Procedures for Labeling DNA, RNA, and Oligonucleotides with DIG, Biotin, or Fluorochromes 41 Random primed labeling of ds DNA with DIG-, Biotin- or Fluorescein-High Prime reaction mix 41 PCR labeling of ds DNA with the PCR DIG Probe Synthesis Kit
。5'末端标记法5'末端标记法是通过化学方法将地高辛标记于寡核苷酸的5'末端。首先在5'末端连接上一个氨基连接臂残基，将合成的寡核苷酸纯化后，再使DIG-NHS与5'末端的氨基残基发生共价结合，从而形成标记RNA。DIG-RNA5'3'5'3'DIGAnti-DIG-APAP-DIG-RNA5'3'5'3'X光片曝光化学发光信号蓝紫色 生物素 用生物素标记RNA的方法常见的是用生物素与UTP结合形成Biotin-UTP，以Biotin-UTPATP、CTP、GTP为底物通过RNA聚合酶SP
的 ULTRAhyb-Oligo 缓冲液（17x 缓冲液）。使用前需在 68℃ 环境中进行溶解。 ( 7 ) 用 0.5 U T4 多核苷酸激酶（PNK，Roche) 和 6 μl [γ-32P ] ATP ( 5000 Ci/mmol ) 标记 1 μmol/L DNA 寡核苷酸（约含有 10 个与目的基因互补的 DNA 寡核苷酸）。 ( 8 ) 参照 Hamilton 和 Baulcombe 的方法，在 35°C 条件下进行 RNA 印迹杂交[14]。 3. 注释 注
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