1)组织切片或细胞爬片染色前处理:
a. 石蜡切片
脱蜡水化:60ºC烤片1小时,二*苯脱蜡二次,每次5分钟;再依次浸入梯度乙醇(无水乙醇-无水乙醇-95%-85%-75%乙醇)和蒸馏水中各5分钟水化。
b. 冰冻切片和细胞爬片
切片(或爬片)浸于0.01 M pH7.4 PBS洗涤3次×5分钟。然后用0.1%Triton X-100覆盖组织(或细胞)浸润15分钟,0.01 M pH7.4 PBS洗涤2次×5分钟。
2)石蜡切片的抗原修复:绝大大多数情况下,石蜡组织切片用柠檬酸缓冲液高压修复都是适合的。
修复工作液配制:1 L去离子水中加入10ml柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液, 100×)(WE0318),混匀即可。
修复过程:修复液加入高压锅内,待修复切片浸于修复液中(必需没过组织),盖上压力锅盖,加热至均匀喷汽,从喷汽开始计时,1~2分钟后压力锅离开热源,自然冷却至室温,取出切片,蒸馏水淋洗后,再用PBS(0.01 M pH7.4)漂洗2次,每次3分钟。