快速去磷酸化试剂盒                     

快速去磷酸化试剂盒中含有快速 CIP, 它是一种热敏型的小牛肠碱性磷酸酶 (CIP)。 快速 CIP 非特异性的催化 DNA 和 RNA 分子5´和3´端磷酸基团的去除反应，此外它还可以水解核糖核苷三磷酸（ NTPs ）和脱氧核糖核苷三磷酸( dNTPs )。快速 CIP 可以广泛应用于 DNA 或 RNA 分子末端的去磷酸化。在分子克隆实验中，去磷酸化可以防止线性化的质粒 DNA 发生自连。该酶作用10 min 即可快速将5´端突出、5´端凹陷和平末端磷酸基团去除。快速 CIP 还可用于降解 PCR 反应产物中游离的 dNTPs，纯化后的 PCR 产物可以作为下游 DNA 测序或 SNP 分析的模板。

快速 CIP 在80°C 孵育2 min 即可发生完全的、不可逆的失活。这一点与野生型 CIP 不同，野生型 CIP 是不能热失活的。因此，在进行连接反应或末端标记实验前，无需去除快速 CIP。 

1X CutSmart 缓冲液:
50 mM Potassium Acetate
20 mM Tris-acetate
10 mM Magnesium Acetate
100 µg/ml BSA
pH 7.9 @ 25°C

试剂盒组成

应用

·        DNA 和 RNA 5´和3´末端的去磷酸化

·        线性化克隆载体 DNA 去磷酸化，防止载体自连

·        使用 T4 多聚核苷酸激酶进行 DNA 末端标记前进行去磷酸化处理

·        测序或 SNP 分析前，PCR 反应产物中 dNTPs 去除 

存储温度

-20°C 

·        CutSmart^® 缓冲液

·        T4 DNA 连接酶

·        快速连接™ 试剂盒

·        粘性末端瞬时连接预混液
·        平末端/TA 连接预混液 

1.      与大部分的磷酸酶一样，快速 CIP 的活性依赖于 Zn²⁺ 和 Mg²⁺。该酶在配方中，已经将锌原子结合到活性中心，因此，反应时无需添加额外的锌离子或其他辅助因子。

2.      CIP 在 1X NEBuffer 1.1、2.1、3.1 和 NEBuffer 1、2、3、4中均有活性。

3.      快速 CIP 在一价盐离子存在时，其活性可被增强。

4.      金属螯合剂 (如 EDTA )、无机磷酸盐和磷酸盐类似物等可抑制快速 CIP 活性。

5.      还原剂(如 DTT、β-巯基乙醇)的存在可抑制快速 CIP 活性。 

1.      Weissig, H. et al. (1993). Biochem. J. 290, 503-508.

2.      Manes, T (1998). J. Biol. Chem.. 273, 23353-23360.