细胞粘附检测试剂盒

特别提示：包括细胞粘附检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞粘附检测试剂盒
产品货号：HR8260
产品规格：500T/1000T

细胞粘附是指细胞与细胞之间及细胞与细胞外基质之间的粘附，细胞粘附是细胞维持形态结构与功能的生物现象，是细胞间信息交流的一种形式。而信息交流的可溶递质称细胞粘附分子(cell adhesion molecμle,CAM)。细胞粘附分子是参与细胞与细胞之间及细胞与细胞外基质之间相互作用的分子。是一类独立的分子结构，是通过识别与其粘附的特异性受体而发生相互间的粘附现象。
细胞的生长、发育、分化及代谢状态和外界细胞因子、炎症介质反应等均可以影响细胞粘附，细胞粘附也可能是肿瘤细胞易发生浸润、转移等现象的分子基础。
细胞粘附检测试剂盒含全套试剂，通过活细胞染色探针W16染色粘附的活细胞数量来反应细胞的粘附能力变化。
本试剂盒不含有包被液。本试剂盒使用比色法进行检测，如果需要荧光法检测的，请选用我公司货号为HR8258的试剂盒。
本试剂盒适合进行常规的总体粘附性能的检测。不含有包被剂，如果需要含包被剂的，可以选用我公司货号为HR0957的试剂盒。

储存条件：2-8℃保存；染色液开盖后2-8℃避光保存，长期不用-20℃避光保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

产品特点：
● 方便：可用酶标仪检测；
●快速：zuì快1小时内即可完成实验；
● 灵敏：数据可靠，重现性好，线性范围更宽；
● 准确：试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠。
检测方法：
酶标仪
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器
●酶标仪●离心机● 移液器●冰箱●冰盒
耗材
●离心管● 吸头
试剂
● Matrigel/ Fibronectin,Fn
● PBS(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：
约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)或者HBSS(Hank"s Balanced Salt Solution； With：Calcium Magnesium Glucose； Without：Phenol Red。Components：CaCl2(anhydrous)140mg/L(1.261mM)、MgCl2-6H2O 100mg/L(0.493mM)、MgSO4-7H2O 100mg/L(0.407mM)、KCl 400mg/L (5.333mM)、KH2PO4 60mg/L(0.441mM)、NaHCO3 350mg/L(4.167mM)、NaCl 8000mg/L(137.931mM)、Na2HPO4(anhydrous)48mg/L(0.338mM)、Glucose 1000mg/L(5.556mM))

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
●细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
●染色培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况下，白细胞较难染色，因此需要较长的培养时间。培养时间一般为1-4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察染色程度 (根据细胞种类而定，需要摸索一下条件)。当使用标准96孔板时，贴壁细胞的zuì小接种量至少为1,000个/孔 (100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔 (100 μl培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入染色液B。
●有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加染色液B试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰O.D 值读数。
● OD 值在0.4-2.0 之间均可，zuì大值控制在1.0左右为宜，小于0.4或大于2.0请调整接种量和培养时间。
包被：
1．根据细胞类型，96孔板每孔加入100μl Matrigel或Fibronectin 包被液。
2．将培养板置2-8℃过夜。
3．移除包被液。
4．用洗涤液洗涤1-3次。
细胞接种：
1．待测定细胞处理好后，用胰酶消化，PBS洗涤，然后用相应培养基重悬，制成细胞悬液。
2．按5×104细胞/孔接种96孔板，建议设3-5个复孔。同时设立对照组，即孵育后不弃上清组。
3．放37℃培养箱孵育30分钟-1小时。
4．取出培养板，吸弃培养基。
【注】：
●对照孔培养基不要吸除。
5．然后用相应的培养基洗涤2-3次。
6．每孔加入100μl新鲜培养基。
粘附率检测：
1．96孔板每孔加入10μl细胞染色液B。
2．37℃孵育30分钟-4小时。
【注】：
● 不同细胞需要孵育的时间差异较大，需要摸索zuì佳孵育时间，一般孵育30分钟后拿出培养板检测对照细胞孔的450nm的OD 值，达到0.8-1.0 即可。
3．测定样品孔OD 值。测定450 nm 各孔的吸光值，如无450nm滤光片，可以使用450-490nm的滤光片。
4．细胞粘附率计算。
将各测试孔的OD值减去空白孔(未加细胞孔)OD值。各重复孔的OD值取平均数。
细胞粘附率% =((待测细胞OD-空白OD)/(对照细胞OD-空白OD))×100

除了细胞粘附检测试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：细胞膜固定剂
货号：SY0540
规格：50ml
固定剂、破膜剂用于细胞内细胞因子染色前对细胞膜的处理。固定剂起稳定细胞膜、保持细胞膜表面抗体与抗原结合的作用；破膜剂使流动的、完整的细胞膜产生小孔以利于抗体进入细胞。用流式细胞仪检测细胞内抗原及DNA时，对待测细胞进行固定、破膜处理后，加入相应抗体或检测试剂，孵育一定时间即可上机分析。

产品组分
4%多聚jiǎ醛、NaOH、NaH2PO4 、1%胎牛血清；pH 7.4-7.6

应用实例
1. 收获待测细胞，1000 rpm离心10 分钟，弃上清。
2. 加入 500 ul预冷(4℃)固定剂。
3. 室温孵育10 分钟。
4. 1000 rpm离心10 分钟。
5. 弃上清，加入PBS洗一次，1000 rpm离心10 分钟。
6. 弃上清，加入1.5 ml破膜剂。
7. 室温孵育10-15 分钟。
8. 1000 rpm离心5 分钟。
9. 弃上清，加入适量破膜剂重悬细胞。
10. 加入检测抗体进行染色后，用流式细胞仪进行分析。

储存条件：4℃避光，勿冰冻，有效期一年。

名称：10-Deacetylbaccatin III
货号：M01469
规格：1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg
10-Deacetylbaccatin-III是紫杉醇制备过程中的中间体。
注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

CAS号：32981-86-5
纯度：98.46%
分子式：C₂₉H₃₆O₁₀
分子量：544.59
结构式：

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

名称：双去甲氧基姜黄素(Bisdemethoxycurcumin)
货号：M01836
规格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
双去甲氧基姜黄素(Bisdemethoxycurcumin)是姜黄素衍生物，具有抗炎症和抗癌活性。
注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

CAS号：33171-05-0
别名：Curcumin III;Didemethoxycurcumin
纯度：98.00%
分子式：C₁₉H₁₆O₄
分子量：308.33
结构式：

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

名称：Cyclandelate
货号：M03044
规格：1mL(10mM)|50mg
Cyclandelate是一种血管扩张剂,用于治疗跛行,动脉硬化,和雷诺氏病,也可用来治疗夜间腿抽筋,已被研究治疗偏头痛的效果。
注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

CAS号：456-59-7
别名：3,5,5-Trimethylcyclohexyl mandelate
纯度：98.0%
分子式：C₁₇H₂₄O₃
分子量：276.37
结构式：

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

名称：Mupirocin
货号：M03635
规格：1mL(10mM)|10mg|50mg
莫匹罗星(Mupirocin)是一抗生素化合物。
注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

CAS号：12650-69-0
别名：BRL-4910A;Pseudomonic acid
纯度：99.08%
分子式：C₂₆H₄₄O₉
分子量：500.62
结构式：

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

名称：Terpin hydrate
货号：M05019
规格：1mL(10mM)|1g
Terpin水合物是一种祛痰药,常用于除去急慢性支气管炎病人的黏液。
注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

CAS号：2451-01-6
别名：Terpin monohydrate;cis-Terpin hydrate
分子式：C₁₀H₂₂O₃
分子量：190.28
结构式：

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

名称：Azacyclonol
货号：M06702
规格：1mL(10mM)|1g|5g
Azacyclonol即γ-pipradol，有消除精神病患者幻觉的活性。
注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

CAS号：115-46-8
别名：γ-pipradol
分子式：C₁₈H₂₁NO
分子量：267.37
结构式：

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

名称：Fluorescein-5-maleimide
货号：M07388
规格：1mL(10mM)|10mg|25mg|50mg
Fluorescein-5-maleimide是一种硫醇反应荧光染料，可用于将荧光素与蛋白质缀合（激发波长：494nm，发射波长：519nm）。
注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

CAS号：75350-46-8
别名：N-(5-Fluoresceinyl)maleimide
纯度：98.00%
分子式：C₂₄H₁₃NO₇
分子量：427.36
结构式：

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

名称：para-iodoHoechst 33258
货号：M07781
规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
para-iodoHoechst33258是Hoechst染料中的一种，Hoechst33258能用于DNA定量的细胞染料。
注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

CAS号：158013-43-5
别名：iodoHoechst 33258
纯度：99.37%
分子式：C₂₅H₂₃IN₆
分子量：534.39
结构式：

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

名称：多聚-L-赖氨酸(15～30万)
货号：QN2712
规格：25mg|100mg
Poly-L-lysine聚合物可用于促进细胞粘附到固体基质。

CAS：25988-63-0
分子量：150,000～300,000
储存条件：无菌溶液可在2～8℃条件下稳定保存2年。脱水保存在-20℃条件下。

原理：
多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂，该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。培养瓶表面的性质对于细胞培养至关重要，细胞表面的糖蛋白（阴性）易于吸附在亲水性的表面上，因而细胞培养表面如果有相当含量的阳性电荷更能促进细胞吸附，这正是运用多聚赖氨酸优化细胞培养表面的重要所在。

应用：
适用组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等使用的玻片的防脱片处理，以防实验操作过程中组织掉片。也可用于细胞培养，增加细胞贴壁能力。

溶液配制：
用去离子水溶解，配制成母液备用。保存于-20℃。

玻片处理：
1．灭菌水稀释聚赖氨酸溶液，一般的使用浓度为0.01％。
2．将玻片浸在稀释的多聚赖氨酸溶液5分钟。注意增加时间不会提高包被效果。
3．在60℃烘箱1小时干燥，或室温18-26℃过夜干燥待用。

注意：
1．每100mL已稀释的多聚赖氨酸溶液要包被的玻片40-90张，超过90张片子将影响其黏合力。
2．用之前的玻片必须保持清洁。必要时用含1% HCl的70%乙醇溶液来清洗。
3．释过的多聚赖氨酸溶液要放在2～8℃，至少在3个月内是稳定的。
4．用过的稀释液要过滤，若出现浑浊或长菌要丢弃
5．多聚赖氨酸浓度可以高一些，吸出来的可以重复利用至少20次。

培养瓶处理：
1．包被培养板或者是培养瓶，一般多聚赖氨酸浓度为0.01％，
2．准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
3．0.01%的多聚赖氨酸以50微升每平方厘米的量均匀涂于培养底物的表面，室温下静置5min，吸除多余液体。
4．加入灭菌水，反复冲洗三次，无菌操作。
5．处理后无菌晾干备用。
6．回收后保持无菌的多聚赖氨酸可反复利用。