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- 2025年07月04日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
1×10^6 细胞数/ml
- 相关疾病：
见说明书
- 细胞形态：
见说明书
- 器官来源：
见说明书
- 运输方式：
复苏或冻存运输
- 年限：
P4代细胞
- 生长状态：
贴壁/悬浮
培养条件：L15+10% FBS；37℃，5% CO2
生长状态：贴壁
细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备培养基；北美胎牛血清，10%；双抗1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
1. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
2. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
3. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。
3. 静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4. 贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。
5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。
6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制，
7. 因为细胞培养过程外因太多，所以我们的售后保障期为一周，超过一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。 T细胞运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；（1550）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
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文献和实验Bcap-37和MDA-MB-435细胞都是人乳腺癌细胞，培养液用DMEM或1640均可，小牛血清10％就足够，不过感觉435细胞用DMEM长得更旺一些。两种细胞都很好养，Bcap-37可称为是最漂亮的乳腺癌细胞，一个个成排列均匀的瓜子状，形态规则，长得也快，一般1：2传代后2－3天即可长满。435长的较慢，需4－5天。传代常规用0.25％的胰酶消化后用含血清的培养基终止消化，视消化程度而决定是否需要离心，传入新瓶加入培养液即可。需要注意的是传代时的密度，特别是435密度低时很难生长。一般生长
HBC裸鼠移植模型的建立包括活检取材的HBC标本和细胞株，后者应用较广泛。本贴主要讨论后者，算是抛砖了！1、人乳腺癌细胞株的选择目前人乳腺癌细胞建株的癌细胞较多，本人曾接触过细胞株总结如下：ER（+）：MCF-7（来源：乳腺腺癌），ZR-75-30（乳腺导管癌），T47D（乳腺导管癌），ZR-75（乳腺腺癌）。ER（-）：MDA-MB-435s（乳腺导管癌），MDA-MB-435（乳腺导管癌），SK-BR-3 （乳腺腺癌），MDA-MB-231（乳腺腺癌），MDA-MB-453（乳腺
腺癌细胞 MDA-MB-157 人乳腺癌细胞 MDA-MB-231 人乳腺癌细胞 MDA-MB-435s 人乳腺癌细胞 MDA-MB-453 人乳腺癌细胞 MG-63 人骨肉瘤细胞 Mo7e 人巨细胞白血病细胞(B类) MOLT-4 人淋巴细胞白血病细胞 NCI-H157 人非小细胞肺腺癌 NCI-H209 人小细胞肺癌 NCI-H446 人小细胞肺癌 NTERA-2 人恶性多发性畸胎瘤细胞 PA-1 人卵巢畸胎瘤细胞 ANC-1 人胰腺癌细胞 PC-3
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