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- 库存:
407
- 英文名:
Uracil DNA Glycosylase
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
1kU|10kU
特别提示:包括尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)
英文名称:Uracil DNA Glycosylase
产品货号:WH0166
产品规格:1kU|10kU
尿嘧啶DNA糖基化酶可催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键,释放游离尿嘧啶。本酶可作用于含有dU的单链或双链DNA,但对寡聚核苷酸(<6个碱基)和RNA无活性。本产品来源于大肠杆菌重组克隆表达。该酶分子量约为25.7kDa。本制品浓度为2U/μl。
产品特点:
·特异性水解含尿嘧啶的长链DNA分子;
·蛋白比活性高,稳定性好。
适用范围:
1.在二代测序(NGS)应用中,主要用于mRNA定向测序文库的构建。
2.PCR反应中,PCR产物污染物的去除。
产品组成:
| 组分 | WH0166-1 | WH0166-2 |
| Uracil DNA Glycosylase | 1000U | 10000U |
| 10×UDG Reaction Buffer | 450μl | 3×1.5ml |
储存条件:-25℃~-15℃保存。
贮存液成分:10mM Tris-HCl,50mM NaCl,0.1μM ATP,0.1mM EDTA,1mM DTT,50%甘油。
单位定义:以含有尿嘧啶的DNA为底物,在1×UDG Reaction Buffer反应液中,37℃、30min内使1.8nmol的尿嘧啶释放游离时所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制:
| 性质 | 描述 |
| 蛋白纯度 | >99% |
| 酶活性 | 77,000 U/mg |
| 单链核酸外切酶活性 | 100 U酶中,<5.0% |
| 双链核酸外切酶活性 | 100 U酶中,<1.0% |
| 双链核酸内切酶活性 | 100 U酶中,未检出 |
| 宿主基因组污染 | 100 U酶中,<10拷贝 |
使用方法:
1.在NGS文库构建过程中,一般按终浓度0.01U/μl的量加入UDG酶。也可根据实验具体情况来调整用量。
反应条件:50℃,10 min。
灭活条件:95℃,2 min。
2.在PCR反应中的建议体系如下:
| 成分 | 用量 |
| 模板DNA | <200ng |
| 引物Mix | 200~500nM,each |
| 10×PCR Buffer | 2μl |
| dN(U)TP | 0.2mM |
| UDG酶(2U/μl) | 0.1 μl |
| Taq酶(5 U/μl) | 0.2μl |
| ddH2O | To 20 μl |
反应条件:50℃,2~10 min。后接PCR反应程序。
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文献和实验的DNA也会是污染源。 可以在PCR过程中使用良好的实验步骤减少残余污染。使用抗气雾剂移液管的阻止气雾剂进入eppendorf管内。为PCR样品配制和扩增后分析设计隔离的区域,在准备新反应前更换手套。总是使用不含有模板的阴性对照检测污染。使用预先混合的反应成分,而不是每个反应的每个试剂单独加入。 一种防止残余污染的方法是使用尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)。这种酶(也称为尿嘧啶-N-糖基化酶或UNG)移除
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