三羧乙基膦(TCEP)溶液，0.5M

环肽的合成方法

，在pH=7的磷酸缓冲液中，巯基与硫酯基生成共价的硫内酯，这种硫内酯自发地经过S原子到N原子酰基迁移而形成环肽，如图： 作者应用上述方法合成了一系列N端为半胱氨酸的Cyclo（Cys-Tyr-Gly-Xaa-Yaa-Leu），为了防止二硫桥的形成和加速环合反应的进行，反应过程中加入TCEP（三羧基乙基膦），反应时间约为4小时，收率在78%～92%之间，HPLC检测未发现副反应和低聚物。 对于不含半胱氨酸的线性多肽的环合，采用亲硫的Ag+离子辅助配位柔性的线性多肽的N端氨基与C端硫酯形成一个环状

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

0.5ml 0.01M KCl，用微电极测其pH。三、仪器和用具1.电泳仪2.垂直管式园盘电泳槽一套3.注射器与针头4.移液管：10ml、5ml、2ml、1ml、0.1ml5.小烧杯若干6.培养皿一套7.直尺8.小刀9.精密pH试纸和带细长复合pH电极的pH计10.塑料薄膜和橡皮筋四、试剂1.丙烯酰胺2.甲叉双丙烯酰胺3.两性电解质Ampholine（40%，pH3.5~9.5）4.过硫酸胺（催化剂）5.TEMED（四甲基乙二胺）（加速剂）6.磷酸7.NaOH8.三氯乙酸（TCA）五、溶液配制1.丙烯

DTT特性与保存及其在蛋白纯化和保存中的作用

分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近。但DTT价格略高一些。DTT粉末的一般保存条件：-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。 由于容易被空气氧化，因此DTT的稳定性较差;但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。由于质子化的硫的亲核性较低，随着pH值的降低，DTT的有效还原性也随之降低;而Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP