- ¥1090
- 钦诚生物
- QC100303
- 上海
- 2025年07月09日
企业认证
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
一年
- 供应商：
钦诚生物
- 保存条件：
室温
- 规格：
50次
1. 即开即用，提供包括玻璃珠、离心吸附柱在内的所有试剂和耗材。
2. 既可以采取液氮研磨法破裂真菌，也可用玻璃珠法破碎真菌，两种方法均属于物 理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外 源真菌 DNA（注：文献报道蜗牛酶或破壁酶中常常有外源真菌 DNA 污染，用于 提取真菌 DNA 往往会造成污染）。
3. 本方法提取一个样品只需要 20 余分钟，方便、快速和高效。
4. 一次可以处理 5 mL 的过夜真菌培养物，所得的基因组 DNA OD260/OD280 一般都在 1.8 左右，长度一般在 20 kb 左右，每 mL 菌液的 DNA 产率一般在 1-3 ug。可以直接用于 PCR 和酶切等后续试验。
1. 收集菌体或孢子: 1.1、 对菌液：取 3-5 mL 过夜培养的真菌菌液 (OD600一般在 1 以上)到干净的 塑料离心管中，12000 rpm 离心 2 分钟弃上清留菌体沉淀。 1.2、 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落（约 50mg）， 转移到装有 1mL 自备无菌水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的 菌体。12000 rpm 离心 2 分钟弃上清留菌体沉淀。 1.3、 对孢子材料，一般取 0.1g 左右，直接加入到塑料离心管中，然后进入下 一步操作。
2. 在上述真菌材料中加入自备的无菌水 1mL，振荡半分钟后 12000 rpm 离心 2 分 钟弃上清留菌体沉淀。此步用于洗涤菌体。
3. 裂解真菌： 3.1、 液氮研磨：在研钵中液氮研磨上述真菌材料成粉，然后转移到干净的离心 管中，在离心管中加入 500 uL 溶液 A，常温涡旋震荡 3 分钟。 3.2、 玻璃珠破碎法：在没有液氮的条件下，采用此法。在菌体沉淀中加入 500 uL 溶液 A 和 0.5 克的玻璃珠，常温涡旋震荡 10 分钟。
4. 在离心管中加入 500 uL 溶液 B，涡旋震荡 3 分钟，12000 rpm 离心 2 分钟， 将上清液全部转移到一个 5mL 的干净的塑料离心管中。
5. 在上清中加入 3 倍体积的溶液 C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次 上柱后均先室温放置 2 分钟，然后 12000 rpm 离心 1 分钟，倒掉穿透液，再第 二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
6. 在离心吸附柱中加入 500 uL 通用洗柱液，12000 rpm 离心 1 分钟，倒掉穿透液。 此步可以洗涤掉杂质。
7. 重复上步操作一次。
8. 12000 rpm 空柱离心 1 分钟。
9. 加入 50-100 uL DNA 洗脱液 2.0，室温放置 1 分钟以上，12000 rpm 离心 1 分钟，穿透液即为真菌 DNA 样品。
10.为了得到更多的 DNA 样品，可以重复上步操作 1-2 次。
11.所得 DNA 即可立即使用或放冰箱长期保存
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验柱式法 Minute TM 胞质胞核分离试剂盒操作方法：A． 悬浮细胞样品（包括植物，细菌，酵母和真菌制备的原生质体）1.500Xg，3 分钟低速离心收集细胞，用预冷的 PBS 清洗一次2. 将细胞转移到 1.5 ml 离心管中，3000 rpm 离心 1-5 分钟，弃去上清。3. 按表格 1 加入适量的胞浆提取缓冲液（请注意样品及裂解液的比例，以达到最佳效果）, 涡旋大力震荡 15 秒, 冰上孵育 5 分钟, 混匀. 接转胞质胞核分离步骤。B. 贴壁细胞1. 贴壁细胞生长至融合度 90
分培养的细胞可 以置于细胞裂解液中，通过简单的涡旋震荡来匀浆；而动物组织、植物组织、酵母和细菌、真菌则常常需要更加剧烈的方法，通常用液氮研磨。比如说细菌（特别是 革兰氏阳性菌）的细胞壁，就需要溶菌酶消化来实现彻底的细胞裂解和RNA的最大回收。酵母和革兰氏阳性菌通常还需要液氮研磨过程中加入玻璃微珠帮助破壁， 酵母提取也可以加入诸如Lyticase等破壁酶帮助破壁，再用TRIpure或RNApure进行提取。4.选择最好的RNA分离方法现有众多的RNA分离方法也许令人难以取舍。目前最简单也是最安全的方法
1个星期，在4°C可稳定保存长达1个月，或永久保存在-20°C。RNAfixer说明书下载. 3. 破壁方法 细胞或组织的彻底匀浆对RNA提取 来说，是一个很关键的步骤，它能够防止RNA的损失和降解。匀浆的方法应根据细胞或组织的类型来选择。大部分培养的细胞可以置于细胞裂解液中，通过简单的涡旋震荡来匀浆;而动物组织、植物组织、酵母和细菌、真菌则常常需要更加剧烈的方法，通常用液氮研磨。比如说细菌(特别是革兰氏阳性菌)的细胞壁，就需要溶菌酶消化来实现彻底的细胞裂解和RNA的最大回收
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
