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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
一年
- 供应商:
钦诚生物
- 保存条件:
室温
- 规格:
50次
本产品是专门用于从动物骨骼(包括骨粉)样品中提取 DNA 的产品。它具有下列特点:
1. 微量提取,一次可以处理 300 mg 左右的骨骼(但需要先将骨粉变成骨 粉)。
2. 柱式操作,方法简单,整个过程只需要 40-60 分钟。
3. 得到的 DNA 分子量不均匀,一般在 20 Kb 到 100 bp 之间,具体取决 于骨骼的新鲜程度,骨粉的加工方法等。
4. 得到的 DNA 可以直接用于 PCR 或荧光 PCR 反应。
使用方法 1. 骨粉的制备:用自备酒精将骨骼表面擦洗干净,以防污染物对后续 PCR 的影响,然后用骨钻在处理干净的骨骼区域钻取骨粉。对于已经制备好的、 商品化的骨粉,可以跳过此步,直接进入下一步。
2. 用天平称取 0.2 克骨粉,转移到 2 mL 塑料离心管中。
3. 加入 1 mL 溶液 A 到骨粉中,充分振荡 30 秒混匀。(注意:溶液 A 在 4℃ 放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充 分摇匀后再取用,且骨粉加到溶液 A 中后会特别黏稠,需使劲振荡混匀。)
4. 65℃水浴放置 30 分钟。
5. 加入 0.3 mL 的溶液 B 和 0.2 mL 的自备氯仿,充分振荡 30 秒混匀。
6. 12,000 rpm 室温离心 3 分钟,小心将上清液转移到一个新的塑料离心 管中。
7. 加入 0.5 mL 溶液 C,颠倒混匀。
8. 将混合液分两次转移到离心吸附柱中,每次转移后需要 12,000 rpm 室 温离心 1 分钟,并弃收集管中的穿透液。
9. 加入 0.5 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rpm 室温离心 1 分钟, 弃收集管中穿透液。
10.再加入 0.5 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rpm 室温离心 1 分 钟,弃收集管中穿透液。
11.12,000 rpm 室温离心半分钟,弃含穿透液的收集管。此步干甩十分重要, 否则残留的液体会抑制后续的 PCR。
12.将离心吸附柱套入到一个自备的干净的 1.5 mL 塑料离心管中,在离心吸 附柱的滤膜的中部加入 30 uL DNA 洗脱液,然后室温放置 2 分钟。如果 先将 DNA 洗脱液预热到 60-80℃再使用,效果更佳。 13.12,000-15,000 g 室温离心 1 分钟,离心管中收集的样品即为骨骼 DNA。
14.取少量进行电泳检测。注意:一般 DNA 都呈现弥散状,分布在 20 Kb 到 100 bp 这一广泛的范围,其比例跟骨骼(或骨粉)的新鲜程度、加工过 程(对骨粉)等因素密切相关。
15.DNA 样品可以直接用于 PCR,也可放-20℃长期保存。
1. 微量提取,一次可以处理 300 mg 左右的骨骼(但需要先将骨粉变成骨 粉)。
2. 柱式操作,方法简单,整个过程只需要 40-60 分钟。
3. 得到的 DNA 分子量不均匀,一般在 20 Kb 到 100 bp 之间,具体取决 于骨骼的新鲜程度,骨粉的加工方法等。
4. 得到的 DNA 可以直接用于 PCR 或荧光 PCR 反应。
使用方法 1. 骨粉的制备:用自备酒精将骨骼表面擦洗干净,以防污染物对后续 PCR 的影响,然后用骨钻在处理干净的骨骼区域钻取骨粉。对于已经制备好的、 商品化的骨粉,可以跳过此步,直接进入下一步。
2. 用天平称取 0.2 克骨粉,转移到 2 mL 塑料离心管中。
3. 加入 1 mL 溶液 A 到骨粉中,充分振荡 30 秒混匀。(注意:溶液 A 在 4℃ 放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充 分摇匀后再取用,且骨粉加到溶液 A 中后会特别黏稠,需使劲振荡混匀。)
4. 65℃水浴放置 30 分钟。
5. 加入 0.3 mL 的溶液 B 和 0.2 mL 的自备氯仿,充分振荡 30 秒混匀。
6. 12,000 rpm 室温离心 3 分钟,小心将上清液转移到一个新的塑料离心 管中。
7. 加入 0.5 mL 溶液 C,颠倒混匀。
8. 将混合液分两次转移到离心吸附柱中,每次转移后需要 12,000 rpm 室 温离心 1 分钟,并弃收集管中的穿透液。
9. 加入 0.5 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rpm 室温离心 1 分钟, 弃收集管中穿透液。
10.再加入 0.5 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rpm 室温离心 1 分 钟,弃收集管中穿透液。
11.12,000 rpm 室温离心半分钟,弃含穿透液的收集管。此步干甩十分重要, 否则残留的液体会抑制后续的 PCR。
12.将离心吸附柱套入到一个自备的干净的 1.5 mL 塑料离心管中,在离心吸 附柱的滤膜的中部加入 30 uL DNA 洗脱液,然后室温放置 2 分钟。如果 先将 DNA 洗脱液预热到 60-80℃再使用,效果更佳。 13.12,000-15,000 g 室温离心 1 分钟,离心管中收集的样品即为骨骼 DNA。
14.取少量进行电泳检测。注意:一般 DNA 都呈现弥散状,分布在 20 Kb 到 100 bp 这一广泛的范围,其比例跟骨骼(或骨粉)的新鲜程度、加工过 程(对骨粉)等因素密切相关。
15.DNA 样品可以直接用于 PCR,也可放-20℃长期保存。
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文献和实验相关实验
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macrocephalus) 牙齿及骨骼中抽提DNA时采用了一种以二氧化硅为吸附介质的方法,从抹香鲸标本骨骼组织中钻取的少量粉末中获得了足够用于分析的DNA产物,此方法扩大了对稀有哺乳动物DNA研究的取材范围。 Caldarelli-stefano等[3〕在从福尔马林固定、石蜡包埋的人体组织标本中提取DNA时利用小磁珠作为结合核,也获得了理想的纯化 DNA。很多试剂公司也依此设计生产了许多颗粒提取试剂盒,Pint。等[4]就探讨了采用 Gibc。公司的GlassMAX系统,对福尔马林固定的组织进行DNA提取的具体
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