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- 钦诚生物
- 上海
- QC0244
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
5ug
基本信息
| 别名: | pAAVMCS |
|---|---|
| 启动子: | CMV promoter |
| 复制子: | pUC ori，f1 ori |
| 终止子: | hGH poly(A) signal |
| 质粒分类: | 腺相关病毒表达质粒 |
| 质粒大小: | 4650bp |
| 原核抗性: | 氨苄青霉素Amp |
| 克隆菌株: | 大肠杆菌Stbl3 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 5'测序引物: | PAAV-MCS-F：TCATACCTCTTATCTTCCTC |
| 3'测序引物: | pFlag-CMV-R：GCACTGGAGTGGCAACTT |
质粒简介
pAAV-MCS载体含有在哺乳动物细胞中基因的高水平表达的CMV启动子和其他元素时。该载体包含AAV-2末端反向重复序列（ITRS），能和pAAV-RC2、pHelper质粒一起包装成腺相关病毒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4650 bp ds-DNA circular SYN 15-AUG-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pAAV-MCS
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4650)
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4650
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
repeat_region 1..141
/note="AAV2 ITR"
/note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus
serotype 2"
enhancer 221..524
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 525..727
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 820..1312
/note="beta-globin Intron"
misc_feature 1319..1394
/note="MCS"
polyA_signal 1397..1873
/note="hGH poly(A) signal"
/note="human growth hormone polyadenylation signal"
repeat_region 1913..2053
/note="AAV2 ITR"
/note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus
serotype 2"
rep_origin 2128..2583
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2865..2969
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 2970..3830
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 4001..4589
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc
61 gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca
121 actccatcac taggggttcc tgcggccgca cgcgtggagc tagttattaa tagtaatcaa
181 ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg cgttacataa cttacggtaa
241 atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg
301 ttcccatagt aacgtcaata gggactttcc attgacgtca atgggtggag tatttacggt
361 aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg
421 tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta catgacctta tgggactttc
481 ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac catggtgatg cggttttggc
541 agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg atttccaagt ctccacccca
601 ttgacgtcaa tgggagtttg ttttgcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa
661 caactccgcc ccattgacgc aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag
721 cagagctcgt ttagtgaacc gtcagatcgc ctggagacgc catccacgct gttttgacct
781 ccatagaaga caccgggacc gatccagcct ccgcggattc gaatcccggc cgggaacggt
841 gcattggaac gcggattccc cgtgccaaga gtgacgtaag taccgcctat agagtctata
901 ggcccacaaa aaatgctttc ttcttttaat atactttttt gtttatctta tttctaatac
961 tttccctaat ctctttcttt cagggcaata atgatacaat gtatcatgcc tctttgcacc
1021 attctaaaga ataacagtga taatttctgg gttaaggcaa tagcaatatt tctgcatata
1081 aatatttctg catataaatt gtaactgatg taagaggttt catattgcta atagcagcta
1141 caatccagct accattctgc ttttatttta tggttgggat aaggctggat tattctgagt
1201 ccaagctagg cccttttgct aatcatgttc atacctctta tcttcctccc acagctcctg
1261 ggcaacgtgc tggtctgtgt gctggcccat cactttggca aagaattggg attcgaacat
1321 cgattgaatt ccccggggat cctctagagt cgacctgcag aagcttgcct cgagcagcgc
1381 tgctcgagag atctacgggt ggcatccctg tgacccctcc ccagtgcctc tcctggccct
1441 ggaagttgcc actccagtgc ccaccagcct tgtcctaata aaattaagtt gcatcatttt
1501 gtctgactag gtgtccttct ataatattat ggggtggagg ggggtggtat ggagcaaggg
1561 gcaagttggg aagacaacct gtagggcctg cggggtctat tgggaaccaa gctggagtgc
1621 agtggcacaa tcttggctca ctgcaatctc cgcctcctgg gttcaagcga ttctcctgcc
1681 tcagcctccc gagttgttgg gattccaggc atgcatgacc aggctcagct aatttttgtt
1741 tttttggtag agacggggtt tcaccatatt ggccaggctg gtctccaact cctaatctca
1801 ggtgatctac ccaccttggc ctcccaaatt gctgggatta caggcgtgaa ccactgctcc
1861 cttccctgtc cttctgattt tgtaggtaac cacgtgcgga ccgagcggcc gcaggaaccc
1921 ctagtgatgg agttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgggcga
1981 ccaaaggtcg cccgacgccc gggctttgcc cgggcggcct cagtgagcga gcgagcgcgc
2041 agctgcctgc aggggcgcct gatgcggtat tttctcctta cgcatctgtg cggtatttca
2101 caccgcatac gtcaaagcaa ccatagtacg cgccctgtag cggcgcatta agcgcggcgg
2161 gtgtggtggt tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag cgccctagcg cccgctcctt
2221 tcgctttctt cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt tccccgtcaa gctctaaatc
2281 gggggctccc tttagggttc cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc aaaaaacttg
2341 atttgggtga tggttcacgt agtgggccat cgccctgata gacggttttt cgccctttga
2401 cgttggagtc cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca aactggaaca acactcaacc
2461 ctatctcggg ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc tattggttaa
2521 aaaatgagct gatttaacaa aaatttaacg cgaattttaa caaaatatta acgtttacaa
2581 ttttatggtg cactctcagt acaatctgct ctgatgccgc atagttaagc cagccccgac
2641 acccgccaac acccgctgac gcgccctgac gggcttgtct gctcccggca tccgcttaca
2701 gacaagctgt gaccgtctcc gggagctgca tgtgtcagag gttttcaccg tcatcaccga
2761 aacgcgcgag acgaaagggc ctcgtgatac gcctattttt ataggttaat gtcatgataa
2821 taatggtttc ttagacgtca ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt
2881 gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa
2941 tgcttcaata atattgaaaa aggaagagta tgagtattca acatttccgt gtcgccctta
3001 ttcccttttt tgcggcattt tgccttcctg tttttgctca cccagaaacg ctggtgaaag
3061 taaaagatgc tgaagatcag ttgggtgcac gagtgggtta catcgaactg gatctcaaca
3121 gcggtaagat ccttgagagt tttcgccccg aagaacgttt tccaatgatg agcactttta
3181 aagttctgct atgtggcgcg gtattatccc gtattgacgc cgggcaagag caactcggtc
3241 gccgcataca ctattctcag aatgacttgg ttgagtactc accagtcaca gaaaagcatc
3301 ttacggatgg catgacagta agagaattat gcagtgctgc cataaccatg agtgataaca
3361 ctgcggccaa cttacttctg acaacgatcg gaggaccgaa ggagctaacc gcttttttgc
3421 acaacatggg ggatcatgta actcgccttg atcgttggga accggagctg aatgaagcca
3481 taccaaacga cgagcgtgac accacgatgc ctgtagcaat ggcaacaacg ttgcgcaaac
3541 tattaactgg cgaactactt actctagctt cccggcaaca attaatagac tggatggagg
3601 cggataaagt tgcaggacca cttctgcgct cggcccttcc ggctggctgg tttattgctg
3661 ataaatctgg agccggtgag cgtgggtctc gcggtatcat tgcagcactg gggccagatg
3721 gtaagccctc ccgtatcgta gttatctaca cgacggggag tcaggcaact atggatgaac
3781 gaaatagaca gatcgctgag ataggtgcct cactgattaa gcattggtaa ctgtcagacc
3841 aagtttactc atatatactt tagattgatt taaaacttca tttttaattt aaaaggatct
3901 aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc
3961 actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc
4021 gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg
4081 atcaagagct accaactctt tttccgaagg taactggctt cagcagagcg cagataccaa
4141 atactgtcct tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt caagaactct gtagcaccgc
4201 ctacatacct cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt
4261 gtcttaccgg gttggactca agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa
4321 cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc
4381 tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc
4441 cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct
4501 ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat
4561 gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc
4621 tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt
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文献和实验相关实验
除了Ad共转染的需求。辅助质粒表达AAV的rep和cap基因和Ad E2A、VAI和E4基因。当辅助质粒在没有Ad感染的情况下共转染到人293细胞中，rAAV载体产量超过了pAAV/Ad包装质粒的80倍。另外，有复制能力的AAV在rAAV制备过程中少于0.00125%。此系统的主要优点是(1)无需感染性的腺病毒(2)只使用两个质粒就提高了转染效率和载体的产出。我们相信该双质粒转染系统因其简便性和高产出而使AAV载体系统能被更广泛地使用。该系统尤其将对多rAAV载体的临床前分析有用 1．简介 腺相关
：同上述的lncRNA方法步骤。 circRNA敲除：同上述的lncRNA方法步骤。 circRNA靶基因寻找：同上述的miRNA和lncRNA双荧光素酶检测方法。 和元生物的优势： 项目经验丰富，成功率高； 价格优惠，享受折扣； 实验周期短； 完善的售后服务。 和元生物提供的服务： 服务内容 服务形式一 服务形式二 整体课题外包服务 miRNA过表达 质粒构建 慢病毒/腺相关病毒/腺病毒
摘要: 腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒，目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分，然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。此方法的局限性包括(1) Ad辅助病毒污染rAAV，(2)rAAV的低产出，(3)生成有复制能力的AAV
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pAAV-MCS腺相关质粒
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